Anticorpo policlonale coniglio anti-Fosfo-EGFR-Y1173 per WB, ELISA - P00533

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'EGFR

• Il recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR) è un recettore chinasi tirosinico che si lega ai ligandi della famiglia EGF e attiva multiple cascate di segnalazione, inclusi RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCγ-PKC e moduli STAT, per regolare risposte cellulari come la proliferazione, la migrazione e la sopravvivenza. Riferimenti correlati: PMID:27153536, PMID:10805725, PMID:2790960
• A seguito del legame del ligando, l'EGFR subisce omo- o eterodimerizzazione e autofosforilazione su residui tirosinici citoplasmatici chiave, inclusi Y1173, creando siti di ancoraggio per proteine adattatrici come GRB2, che propagano la segnalazione a valle. Riferimenti correlati: PMID:12297049, PMID:15611079
• L'EGFR può anche fosforilare direttamente substrati come RGS16 e MUC1, e partecipa alla segnalazione NF-kappa-B, collegandolo alle vie dei recettori accoppiati a proteine G e all'adesione cellulare. Riferimenti correlati: PMID:11602604, PMID:11483589, PMID:11116146
• L'isoforma 2 dell'EGFR può funzionare come antagonista dell'azione dell'EGF ed è notevolmente espressa nei tumori ovarici.
• L'EGFR si localizza principalmente alla membrana cellulare, ma anche al reticolo endoplasmatico, apparato di Golgi, nucleo, endosomi, e può essere secreto, riflettendo i suoi ruoli dinamici di traffico e segnalazione.
• Le principali modificazioni post-traduzionali includono la fosforilazione (su tirosina, serina, treonina), glicosilazione, ubiquitinazione e palmitoilazione, che regolano la sua attività, stabilità e reti di interazione.
• Espresso ubiquitariamente, l'EGFR svolge ruoli nello sviluppo, memoria, apprendimento e segnalazione del dolore, e la sua disregolazione è implicata in vari tumori.
• L'EGFR serve anche da recettore cellulare ospite per l'ingresso del virus dell'epatite C (HCV), facilitando l'internalizzazione virale negli epatociti.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico specifico per Y1173 dell'EGFR umano. Per il Western blot, si consiglia di utilizzare tamponi di lisi specifici per fosfo-proteine e inibitori delle fosfatasi per preservare lo stato di fosforilazione durante la preparazione del campione.
• Dato che l'EGFR è altamente fosforilato dopo la stimolazione del ligando, il trattamento delle cellule con EGF prima del raccolto può migliorare il rilevamento del segnale in WB; al contrario, la privazione di siero e/o il trattamento con fosfatasi possono essere utilizzati per verificare la specificità fosfo.
• Per l'ELISA, considerare l'utilizzo dell'anticorpo in formato sandwich con un anticorpo di cattura totale EGFR per quantificare i livelli di fosfo-EGFR nei lisati cellulari o negli estratti tissutali.
• La cross-desorbimento con il peptide non fosforilato può essere eseguito per confermare la specificità fosfo sia in WB che in ELISA.

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