Anticorpo Monoclonale Anti-Fosfo-EGFR-Y845 per WB, IF/ICC, ELISA - P00533

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di EGFR

• EGFR (Recettore del Fattore di Crescita Epidermico), noto anche come ErbB-1 o HER1, è un recettore tirosin-chinasico transmembrana appartenente alla famiglia ERBB. Un isoforma derivante da splicing alternativo (isoforma 2) può funzionare come antagonista dell'azione dell'EGF.
• Come recettore tirosin-chinasico, EGFR lega vari ligandi della famiglia EGF e innesca cascate di segnalazione intracellulari che convertono segnali extracellulari in appropriate risposte cellulari, inclusa proliferazione, differenziamento e sopravvivenza (PubMed:10805725, PubMed:27153536, PubMed:2790960). Riferimenti correlati: PMID:10805725 PMID:27153536 PMID:2790960
• Ligandi noti includono EGF, TGFA/TGF-alfa, AREG, epigen/EPGN, BTC/betacellulina, epiregulina/EREG e HBEGF/EGF legante l'eparina (PubMed:12297049, PubMed:15611079, PubMed:17909029). Riferimenti correlati: PMID:12297049 PMID:15611079 PMID:17909029
• Il legame del ligando induce omo- e/o eterodimerizzazione del recettore e successiva autofosforilazione su tirosine citoplasmatiche chiave. La tirosina 845 fosforilata (Y845), situata nel loop di attivazione del dominio chinasico, è critica per stabilizzare la conformazione attiva e potenziare l'attività catalitica.
• L'autofosforilazione porta al reclutamento di proteine adattatrici come GRB2, attivando molteplici moduli a valle inclusi RAS-RAF-MEK-ERK, PI3K-AKT, PLCgamma-PKC, STATs e possibilmente NF-kappa-B (PubMed:11116146, PubMed:27153536). Riferimenti correlati: PMID:11116146 PMID:27153536
• EGFR fosforila direttamente altre proteine, come RGS16 (attivandone l'attività GTPasica) e MUC1 (potenziandone l'interazione con SRC e beta-catenina) (PubMed:11602604, PubMed:11483589). Riferimenti correlati: PMID:11602604 PMID:11483589
• Regola positivamente la migrazione cellulare tramite interazione con CCDC88A/GIV, che trattiene EGFR alla membrana cellulare dopo stimolazione con ligando (PubMed:20462955). Riferimenti correlati: PMID:20462955
• EGFR si localizza principalmente alla membrana cellulare ma si trova anche nel reticolo endoplasmatico, apparato di Golgi, nucleo, endosomi e può essere secreto negli esosomi. È espresso ubiquitariamente, con l'isoforma 2 rilevata in modo significativo nei tumori ovarici.
• Oltre ai suoi ruoli fisiologici normali, EGFR agisce come recettore della cellula ospite per l'ingresso del virus dell'epatite C (HCV), mediando la formazione del complesso corecettore CD81-CLDN1 e potenziando la fusione della membrana virale.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Poiché questo anticorpo riconosce un epitopo dipendente dalla fosforilazione, includere inibitori delle fosfatasi nei buffer di lisi e maneggiare i campioni rapidamente a basse temperature per preservare il segnale di fosforilazione.
• Per il western blot, aspettarsi una banda principale intorno a 134 kDa. Per confermare la specificità per la fosforilazione, considerare di trattare i lisati cellulari con fosfatasi lambda o eseguire saggi di competizione con peptide usando la controparte non fosforilata del peptide immunogeno.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, è atteso un pattern di colorazione prevalentemente associato alla membrana; una colorazione co-localizzata con un marcatore di membrana plasmatica può aiutare a confermare la localizzazione.
• Per applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere usato per catturare o rilevare EGFR fosforilato; ottimizzare empiricamente le condizioni di rivestimento e rilevamento.
• Validato per reattività umana; per altre specie, verificare sperimentalmente l'omologia di sequenza intorno a Y845 e la reattività crociata.

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