Anticorpo Monoclonale Anti-Fosfo-eIF2α-S51 per WB, ELISA - P05198

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione dell'eIF2α

• Il fattore di inizio della traduzione eucariotica 2 subunità 1 (eIF2α) è un componente fondamentale del complesso eterotrimerico eIF2, noto anche come eIF-2-alpha, eIF-2A o eIF2-alpha. Insieme a eIF2β ed eIF2γ, orchestra i passaggi iniziali della sintesi proteica dipendente dal cap. Riferimenti correlati: PMID:16289705
• Forma un complesso ternario con GTP e la metionil-tRNA iniziatrice, che si associa poi alla subunità ribosomica 40S, facilitando il reclutamento dell'mRNA per formare un complesso di pre-inizio 43S. L'idrolisi successiva del GTP e il rilascio di eIF2-GDP consentono la formazione del complesso 80S. Riferimenti correlati: PMID:16289705
• La fosforilazione alla serina 51 (S51) da parte di chinasi attivate dallo stress (HRI, PKR, PERK, GCN2) converte l'eIF2α in un inibitore globale della traduzione, un evento centrale nella risposta allo stress integrata (ISR). Questo attenua la sintesi proteica generale mentre aumenta la regolazione di mRNA selettivi come ATF4 e QRICH1, consentendo l'adattamento cellulare allo stress. Riferimenti correlati: PMID:19131336 PMID:33384352
• Oltre al controllo della traduzione, l'eIF2α fosforilato promuove la mitofagia indipendente da PRKN trasferendosi alla membrana esterna mitocondriale in seguito a danni mitocondriali, fornendo un collegamento diretto tra la riprogrammazione traduzionale e il controllo di qualità degli organelli. Riferimenti correlati: PMID:38340717
• L'eIF2α è prevalentemente citoplasmatico e può concentrarsi nei granuli di stress in condizioni avverse. Si localizza anche sulla superficie mitocondriale dopo la fosforilazione indotta dallo stress ed è stato rilevato nel citosol.
• Questa proteica è soggetta a molteplici modificazioni post-traduzionali, inclusa la fosforilazione e l'acetilazione, che regolano finemente la sua attività, il targeting subcellulare e le interazioni.
• Come proteina altamente conservata, l'eIF2α è espresso nei tessuti umano, del topo e del ratto, sottolineando il suo ruolo essenziale nel controllo della traduzione e nella gestione dello stress cellulare.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico che copre la S51 dell'eIF2α umano (NP_004085.1); pertanto l'anticorpo è progettato per riconoscere la forma fosforilata. L'eIF2α non fosforilato potrebbe non essere rilevato.
• Per il western blotting, includere inibitori delle fosfatasi nei tamponi di lisi e incubazione per preservare il segnale di fosforilazione S51. Verificare la specificità dell'anticorpo trattando i campioni con λ-fosfatasi o fosfatasi intestinale di vitello prima dell'analisi.
• Poiché la fosforilazione dell'eIF2α è spesso rapida e transitoria in condizioni di stress, ottimizzare i tempi di preparazione del campione e i protocolli di induzione dello stress (es. carenza di siero, stress del reticolo endoplasmatico o privazione di aminoacidi) nel sistema cellulare o tessutale pertinente.
• Per le applicazioni ELISA, considerare l'uso di una coppia di cattura/rilevamento che differenzi l'eIF2α totale e quello fosforilato se è richiesta la quantificazione simultanea di entrambe le forme; validare il saggio con appropriati controlli positivi e negativi.

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