Anticorpo policlonale coniglio Anti-Fosfo-eIF4EBP1-S65 per WB, ELISA - Q13541

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di eIF4EBP1

• eIF4EBP1 (fattore di inizio della traduzione eucariotica 4E-binding protein 1), noto anche come PHAS-I (proteina fosforilata stabile al calore e all'acido regolata dall'insulina 1), è un key repressore dell'inizio della traduzione dipendente dalla cappuccio.
• Nello suo stato ipofosforilato, 4E-BP1 compete con eIF4G per il legame con eIF4E, impedendo così l'assemblaggio del complesso eIF4F e inibendo la traduzione. La iperfosforilazione, come a Ser65, promuove il distacco da eIF4E, permettendo alla traduzione dipendente dalla cappuccio di procedere.
• 4E-BP1 integra segnali da fattori di crescita, ormoni e nutrienti tramite le vie chinasi MAP e mTORC1, con la fosforilazione mediata da mTORC1 in siti multipli (inclusi Thr37/46, Ser65 e Thr70) che è critica per la sua inattivazione.
• 4E-BP1 appartiene alla famiglia delle proteine leganti eIF4E e condivide un motivo di legame eIF4E conservato (YXXXXLΦ) che interagisce direttamente con la superficie dorsale di eIF4E.
• La localizzazione subcellulare è principalmente citoplasmatica, ma 4E-BP1 può traslocare nel nucleo, dove può regolare la traduzione nucleare o altre funzioni. La dinamica della fosforilazione compartimentata può variare.
• Oltre alla fosforilazione, 4E-BP1 subisce acetilazione, ubiquitinazione (formazione di legami isopeptidici) e altre modificazioni post-traduzionali che regolano la sua stabilità e attività, classificandola come una fosfoproteina e un bersaglio della coniugazione simile all'ubiquitina.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico fosforilato circostante Ser65, quindi ci si aspetta che la reattività dell'anticorpo sia specifica per la fosforilazione. Per ELISA, considerare la pre-incubazione dell'anticorpo con un peptide non fosforilato per confermare la specificità fosfo-specifica.
• Nel western blotting, includere il rilevamento totale di 4E-BP1 (utilizzando un anticorpo pan) per monitorare sia i livelli totali di proteina che lo stato di fosforilazione. Utilizzare inibitori appropriati delle fosfatasi nei tamponi di lisi.
• L'anticorpo riconosce la 4E-BP1 umana. Validare le prestazioni in linee cellulari umane o campioni di tessuto; la reattività con altre specie non è stata riportata, quindi si consiglia di testare la reattività crociata se applicato a campioni non umani.
• Essendo un anticorpo policlonale di coniglio, la coerenza tra lotti deve essere monitorata; si raccomandano esperimenti pilota con il lotto specifico.

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