Anticorpo policlonale Anti-Fosfo-eIF4EBP1-T36 per WB, ELISA - Q13541

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di eIF4EBP1

• Il fattore di inizio della traduzione eucariotica 4E-binding protein 1 (eIF4EBP1), noto anche come PHAS-I, è un chiave repressore dell'inizio della traduzione dipendente dal cappuccio.
• Nello suo stato ipofosforilato, eIF4EBP1 si lega strettamente a eIF4E, impedendo la formazione del complesso eIF4F e inibendo la traduzione.
• La fosforilazione in più siti, incluso Thr36, porta a eIF4EBP1 iperfosforilato che si dissocia da eIF4E, permettendo così alla traduzione di procedere.
• eIF4EBP1 integra segnali da vari fattori di crescita e ormoni tramite le vie chinasi MAP e mTORC1, regolando la sintesi proteica in risposta agli stimoli extracellulari.
• A livello subcellulare, eIF4EBP1 si trova sia nel citoplasma che nel nucleo, spostandosi tra i compartimenti per regolare la disponibilità di eIF4E.
• Le modifiche post-traduzionali includono fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione, che modulano la sua attività e stabilità.
• Come nodo critico nell'asse di segnalazione PI3K/AKT/mTOR, eIF4EBP1 è implicato nella crescita cellulare, proliferazione e metabolismo, rendendolo un biomarcatore per il cancro e i disturbi metabolici.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Dato che l'immunogeno è un fosfopeptide specifico per Thr36 di eIF4EBP1, verificare il legame dipendente dalla fosforilazione trattando i campioni con fosfatasi o utilizzando la competizione con peptide non fosforilato.
• Per il Western blot, può essere rilevata una banda a circa 13-15 kDa; notare che la fosforilazione spesso induce bande multiple a causa dei diversi stati di fosforilazione.
• È indicata la reattività incrociata con eIF4EBP1 di mouse e ratto; tuttavia, confermare l'omologia di sequenza attorno a Thr36 e validare nelle linee cellulari o tessuti pertinenti.
• Considerare l'inclusione di controlli positivi appropriati, come lisati di cellule stimolate con insulina o siero, per osservare segnali dipendenti dalla fosforilazione.
• Per ELISA, l'immobilizzazione del fosfo-peptide e il rilevamento con anticorpo secondario anti-coniglio possono essere ottimizzati; assicurarsi che i passaggi di blocco riducano il legame non specifico.
• Evitare cicli di congelamento-scongelamento e conservare l'anticorpo in modo appropriato, come indicato dalla condizione di spedizione in borsa del ghiaccio.

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