Anticorpo policlonale Anti-Fosfo-eNOS-S1177 per WB, IHC-P, ELISA - P29474

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di eNOS

• eNOS (Nitric oxide synthase 3) è un enzima espresso costitutivamente che catalizza la produzione di ossido nitrico (NO), una molecola di segnalazione fondamentale implicata nel rilassamento della muscolatura liscia vascolare attraverso una via mediata da cGMP e nell'angiogenesi indotta da VEGF. Riferimenti correlati: PMID:1378832
• Il NO prodotto da eNOS svolge anche un ruolo nell'attivazione piastrinica e nella regolazione della coagulazione del sangue.
• L'enzima si localizza sulla membrana plasmatica, nelle caveole, nel citoplasma, sul citoscheletro e sull'apparato di Golgi, riflettendo la sua regolazione subcellulare dinamica.
• eNOS è espresso nelle piastrine, nella placenta, nel fegato e nel rene.
• Lo splicing alternativo genera un isoforma dominante negativa che priva eNOS della sua attività e può downregolare la funzione di eNOS formando eterodimeri con l'isoforma 1.
• Le modifiche post-traduzionali chiave includono la fosforilazione alla Ser1177 (l'epitopo riconosciuto da questo anticorpo), oltre a miristoilazione e palmitoilazione per l'ancoraggio alla membrana.
• L'attività di eNOS dipende da cofattori come eme, FAD, FMN, NADP, calmodulina e metalli come calcio e zinco.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per il Western blotting, includere controlli appropriati (ad esempio, cellule endoteliali non stimolate rispetto a cellule stimolate) e inibitori delle fosfatasi per verificare la fosfo-specificità e prevenire la defosforilazione.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), convalidare l'anticorpo in sezioni incluse in paraffina utilizzando il recupero dell'antigene ed eseguire una colorazione parallela con un anticorpo anti-eNOS indipendente dalla fosforilazione per valutare la specificità.
• Per le applicazioni ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato per catturare o rilevare eNOS fosforilato (Ser1177) in lisati cellulari o preparazioni di proteine ricombinanti; si consiglia di utilizzare un anticorpo anti-eNOS totale per la normalizzazione.
• Il peso molecolare previsto di eNOS è di circa 133 kDa; utilizzare marcatori di peso molecolare e percentuali di gel appropriati per una risoluzione chiara.
• La reattività incrociata è stata segnalata per uomo e topo; se si utilizzano altre specie, eseguire un allineamento di sequenza per valutare la conservazione dell'epitopo e convalidare empiricamente la reattività.

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