Anticorpo monoclonale di coniglio anti-fosfo-eNOS (S1177) per WB, ELISA - P29474

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della eNOS

• La eNOS (Ossido nitrico sintasi 3) catalizza la produzione di ossido nitrico (NO), che agisce come vasodilatatore tramite il rilassamento della muscolatura liscia mediato da cGMP. Riferimenti correlati: PMID:1378832
• L'NO prodotto dalla eNOS è inoltre fondamentale per l'angiogenesi mediata dal VEGF e per l'attivazione piastrinica, collegando la funzione endoteliale alla salute circolatoria.
• Lo splicing alternativo genera un isoforma dominante negativa che può eterodimerizzare con l'enzima full-length, potenzialmente downregolando l'attività della eNOS.
• La eNOS è localizzata nelle caveole sulla membrana plasmatica, nell'apparato di Golgi e nel citoscheletro, permettendo una segnalazione NO compartimentalizzata.
• La proteina subisce molteplici modifiche post-traduzionali, tra cui la fosforilazione alla Ser1177 (associata all'attivazione), la miristoilazione e la palmitoilazione, che regolano il suo indirizzamento subcellulare e la sua attività.
• L'espressione della eNOS è rilevata nelle piastrine, nella placenta, nel fegato e nel rene, mentre le cellule endoteliali vascolari rappresentano la sede principale della sua funzione.
• L'enzima richiede molti cofattori: eme, FAD, FMN, NADPH e zinco, e lega la calmodulina in modo dipendente dal calcio per l'attivazione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico corrispondente alla regione della Ser1177, il che indica che l'anticorpo riconosce la forma fosforilata della eNOS in questo sito.
• Per Western blot, si consiglia di utilizzare inibitori di fosfatasi nei buffer di lis per preservare la fosforilazione e validare la specificità della banda utilizzando controlli trattati con fosfatasi.
• Le applicazioni ELISA possono richiedere l'ottimizzazione delle condizioni di coating e rilevazione; si consiglia di testare un intervallo di diluizioni dell'anticorpo e di agenti di bloccaggio.
• Validare la specificità in lisati di cellule o tessuti umani rilevanti, poiché non è indicata una reattività crociata con altre specie; includere controlli positivi e negativi appropriati.

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