Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Phospho-FAK-Y925 per WB, ELISA - Q05397

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di FAK

• La chinasi dell'adesione focale 1 (FAK/PTK2) è una tirosin-chinasi non recettoriale che funge da regolatore critico della migrazione, adesione, diffusione e riorganizzazione del citoscheletro di actina delle cellule. Integra la segnalazione da integrine, recettori dei fattori di crescita e recettori accoppiati a proteine G.
• FAK subisce autofosforilazione a Y397 dopo l'attivazione, creando un sito di legame ad alta affinità per le chinasi della famiglia SRC. La successiva fosforilazione a Y925 favorisce il reclutamento di GRB2, collegandosi alla cascata di segnalazione della chinasi MAP/ERK e contribuendo alla proliferazione e sopravvivenza cellulare.
• La proteina si localizza dinamicamente alle adesioni focali, alla membrana cellulare, al citoplasma perinucleare, al cortex cellulare, al centrosoma e al nucleo. Questa distribuzione consente un controllo spazio-temporale della trasduzione del segnale e del rimodellamento del citoscheletro.
• FAK fosforila molteplici substrati, tra cui NEDD9 (che potenzia la segnalazione mediata da integrine), BCAR1, GRB7 e SRC stessa, modulando così le vie a valle come le cascate PI3K/AKT e Rho GTPasi. Riferimenti correlati: PMID:9360983
• L'isoforma 6 (FRNK), una variante splicing alternativa priva del dominio chinasico, agisce come inibitore endogeno bloccando la fosforilazione di FAK e la segnalazione nucleare, attenuando la trascrizione dipendente da SRF.
• FAK è espressa in modo ubiquitario, con rilevamento notevole nei linfociti B e T, nei fibroblasti polmonari e nelle cellule epiteliali. Riferimenti correlati: PMID:31630787
• Le modifiche post-traduzionali, in particolare la fosforilazione ai residui Y397, Y576, Y577, Y861 e Y925, regolano strettamente l'attività di FAK. La fosforilazione di Y925 guida specificamente l'interazione con GRB2 e l'attivazione della via MAPK, rendendola un marcatore chiave per la segnalazione di FAK in contesti di sviluppo e cancro.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico che circonda la tirosina 925 di FAK umano; si prevede che l'anticorpo riconosca FAK solo quando fosforilata in questo sito. Per un'ottimale specificità in WB, considerare l'uso di inibitori della fosfatasi durante la preparazione del campione per preservare la fosforilazione.
• Peso molecolare previsto: ~119 kDa. Una banda vicina a questa dimensione nei lisati di cellule umane supporta il rilevamento, ma potrebbero verificarsi bande aggiuntive da isoforme o modifiche post-traduzionali, quindi confrontare con controlli di FAK totale.
• Per l'ELISA, includere un controllo con peptide non fosforilato per confermare la specificità fosfo. Titrare la concentrazione dell'anticorpo per minimizzare il fondo e massimizzare il rapporto segnale/rumore nelle specifiche condizioni del saggio.
• Questo prodotto ha reattività documentata con campioni umani; la reattività crociata con altre specie è sconosciuta. Convalidare le prestazioni in qualsiasi sistema modello non umano con appropriati controlli positivi e negativi.

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