Anticorpo policlonale coniglio anti-Fosfo-FLT3-Y589/591 per WB, ELISA - P36888

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di FLT3

• FLT3 (Fms-like tyrosine kinase 3), denominato anche FLK2, STK1 e CD135, è una tirosin-chinasi di tipo recettoriale che lega FLT3LG per regolare la differenziazione, proliferazione e sopravvivenza delle cellule progenitrici ematopoietiche e delle cellule dendritiche.
• La segnalazione a valle include la fosforilazione di SHC1 e AKT1, l'attivazione di MTOR, la cascata RAS/MAPK (MAPK1/ERK2, MAPK3/ERK1) e le proteine STAT5, sebbene FLT3 di tipo selvaggio indichi solo un'attivazione marginale di STAT5.
• FLT3 si localizza sulla membrana cellulare e nel lume del reticolo endoplasmatico.
• L'espressione è rilevata nel midollo osseo, cellule staminali ematopoietiche, cellule progenitrici mieloidi e granulociti/macrofagi; inoltre è presente nel fegato, timo, milza, linfonodi, reni e pancreas, con livelli elevati nella leucemia a cellule T.
• Le mutazioni che causano attività costitutiva della chinasi guidano la proliferazione cellulare e la resistenza all'apoptosi attraverso molteplici vie, confermando FLT3 come proto-oncogene e una variante chiave nella leucemia mieloide acuta.
• Come glicoproteina e fosfoproteina, FLT3 subisce splicing alternativo ed è soggetto a coniugazione con ubiquitina; svolge anche un ruolo nelle interazioni ospite-virus.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Poiché questo anticorpo bersaglia siti di fosforilazione, utilizzare tamponi di lisi integrati con inibitori di fosfatasi per preservare l'epitopo fosforilato durante la preparazione del campione per Western blot.
• Si consiglia di stimolare le cellule che esprimono FLT3 (ad esempio linee leucemiche) con il ligando di FLT3, o trattare con inibitori di chinasi, per confermare la rilevazione specifica della fosforilazione.
• Per ELISA, il fosfopeptide immunogeno può essere utilizzato come controllo positivo; le condizioni di rivestimento della piastra e di rilevazione possono richiedere ottimizzazione.
• Convalidare la specificità dell'anticorpo confrontando i segnali da lisati di tipo selvaggio e lisati trattati con fosfatasi, o utilizzando la mutagenesi sito-specifica di Y589/Y591.

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