Anticorpo policlonale coniglio anti-Phospho-IRS1-S612 per WB, IHC-P, ELISA - P35568

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di IRS1

• Il substrato del recettore dell'insulina 1 (IRS1) è una proteina adattatrice di segnalazione che media la trasduzione del segnale dal recettore dell'insulina (INSR) e dal recettore del fattore di crescita insulino-simile I (IGF1R), svolgendo un ruolo fondamentale nello sviluppo, nella crescita, nell'omeostasi glucidica e nel metabolismo lipidico. Riferimenti correlati: PMID:7541045, PMID:33991522, PMID:38625937, PMID:19639489
• Dopo la fosforilazione da parte del recettore dell'insulina, IRS1 funge da impalcatura di segnalazione che diffonde l'azione insulinica legandosi a proteine contenenti dominio SH2, tra cui la subunità regolatoria p85 della PI3K, NCK1, NCK2, GRB2 e SHP2. Riferimenti correlati: PMID:11171109, PMID:8265614
• Il reclutamento di GRB2 attiva la via di segnalazione Ras/Raf/MEK/MAPK, mentre il reclutamento della PI3K innesca la via PI3K/AKT, coordinando le risposte metaboliche e mitogeniche.
• IRS1 agisce da regolatore positivo della via di segnalazione Wnt/beta-catenina sopprimendo la degradazione di DVL2 mediata dall'autofagia, promuovendo così la proliferazione cellulare. Riferimenti correlati: PMID:24616100
• La localizzazione subcellulare include il citoplasma e il nucleo.
• IRS1 subisce estese modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, S-nitrosilazione e ubiquitinazione. Questo anticorpo rileva specificamente la fosforilazione alla serina 612, un sito regolatorio nella segnalazione di IRS1.
• Le variazioni genetiche di IRS1 sono associate alla suscettibilità al diabete mellito.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico corrispondente alla regione S612; pertanto, è previsto che l'anticorpo riconosca specificamente IRS1 fosforilato in questo sito. Per il western blot, si consiglia di confermare la fosfo-specificità tramite trattamento con lambda fosfatasi o saggi di competizione con peptide fosforilato.
• Il peso molecolare previsto di IRS1 è di circa 132 kDa. Durante l'esecuzione di WB, utilizzare una percentuale di gel appropriata (ad esempio, SDS-PAGE all'8%) e ottimizzare le condizioni di trasferimento per proteine ad alto peso molecolare.
• La reattività incrociata con topo e ratto suggerisce una conservazione della sequenza dell'epitopo; tuttavia, si raccomanda la validazione nel sistema di campioni pertinente.
• Per IHC-P, potrebbe essere necessario il recupero dell'antigene, e l'aggiunta di inibitori della fosfatasi durante la lavorazione dei tessuti può aiutare a preservare la fosforilazione. La diluizione e l'incubazione dell'anticorpo primario devono essere ottimizzate empiricamente.
• Nelle applicazioni ELISA, si consiglia il rivestimento con il peptide fosforilato e la rilevazione può essere eseguita utilizzando protocolli ELISA indiretti standard.

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