Anticorpo policlonale coniglio Anti-Fosfo-mTOR-S2448 per WB, IF/ICC, ELISA - P42345

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della chinasi proteica serina/treonina mTOR

• La chinasi proteica serina/treonina mTOR (MTOR, nota anche come FRAP/FRAP1/FRAP2/RAFT1/RAPT1) è un regolatore master di 289 kDa del metabolismo cellulare, della crescita e della sopravvivenza, integrando segnali ormonali, nutrizionali e di stress. Riferimenti correlati: PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926
• MTOR funge da nucleo catalitico di due complessi distinti, mTORC1 e mTORC2, che differiscono nella composizione delle subunità, nella regolazione a monte e nei bersagli a valle. Riferimenti correlati: PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:18497260
• mTORC1 attivato promuove la sintesi proteica fosforilando EIF4EBP1 per alleviare la sua inibizione di eIF4E, e fosforilando RPS6KB1/2 per guidare la fosforilazione della proteina ribosomiale S6 e l'inizio della traduzione. Riferimenti correlati: PMID:12087098 PMID:12150925 PMID:12150926 PMID:24403073 PMID:29236692 PMID:18925875
• mTORC1 stimola la sintesi dei lipidi e dei nucleotidi attivando rispettivamente SREBF1/SREBP1 e CAD, coordinando la produzione di macromolecole per la crescita cellulare. Riferimenti correlati: PMID:23429703 PMID:23429704 PMID:23426360
• In condizioni di sufficienza nutrizionale, mTORC1 sopprime l'autofagia fosforilando regolatori chiave dell'autofagia tra cui ULK1 (Ser‑758), DAP, RUBCNL e AMBRA1. Riferimenti correlati: PMID:32561715 PMID:20537536 PMID:30704899 PMID:23524951 PMID:25438055
• Il complesso mTORC2 fosforila le chinasi AGK tra cui AKT a Ser‑473, PKC e SGK1, regolando la sopravvivenza cellulare, la proliferazione e la riorganizzazione del citoscheletro di actina. Riferimenti correlati: PMID:15268862 PMID:15467718 PMID:21376236 PMID:15718470 PMID:24670654
• MTOR si localizza dinamicamente alle membrane lisosomiali, del reticolo endoplasmatico, di Golgi, mitocondriali e nucleari; l'attivazione di mTORC1 è strettamente accoppiata al suo reclutamento sulla superficie lisosomiale.
• MTOR è ampiamente espresso, con i livelli più alti nei testicoli, ed è regolato da una vasta fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico che copre la Ser‑2448; pertanto, l'anticorpo riconosce mTOR solo quando è fosforilato a questo residuo. Per il Western blot, trattare le cellule con stimoli appropriati (es. fattori di crescita, aminoacidi) e includere inibitori delle fosfatasi nei tamponi di lisi per preservare la fosforilazione.
• Per il Western blotting della proteina mTOR da 289 kDa, utilizzare un gel di poliacrilamide a bassa percentuale (es. 6–8%) e un tempo di trasferimento più lungo. Verificare l'efficienza del trasferimento con un marcatore pre-colorato.
• Per l'immunofluorescenza (IF/ICC), fissare le cellule con paraformaldeide, permeabilizzare in modo appropriato e utilizzare un tampponi di blocco per ridurre il legame non specifico. Confermare la localizzazione mediante colorazione concomitante con marcatori lisosomiali se si studia l'attivazione di mTORC1.
• Le applicazioni ELISA possono coinvolgere il rivestimento con peptide o proteina; validare le condizioni del saggio (tamponi di rivestimento, agente di blocco, diluizione dell'anticorpo) nella matrice specifica.

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