Anticorpo policlonale rabbit anti-Fosfo-NCF4 (p40-phox) T154 per WB e ELISA - Q15080

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NCF4/p40-phox

• NCF4 codifica per il fattore citosolico neutrofilo 4, anche noto come p40-phox, una subunità regolatoria essenziale del complesso NADPH ossidasi dei fagociti.
• Insieme ad altri fattori citosolici, p40-phox partecipa all'assemblaggio e all'attivazione del complesso enzimatico NOX2, che genera anioni superossido per l'uccisione microbica.
• La proteina contiene un dominio PX N-terminale che lega il fosfatidilinositolo 3-fosfato, indirizzando il complesso verso le membrane fagosomali ed endosomiali.
• Un dominio SH3 centrale media le interazioni con altre subunità dell'ossidasi, facilitando l'assemblaggio del complesso.
• La fosforilazione in Thr154 è fondamentale per l'attivazione, promuovendo cambiamenti conformazionali e la traslocazione sulla membrana.
• Espresso esclusivamente nelle cellule ematopoietiche, NCF4 svolge un ruolo specializzato nella difesa immunitaria innata.
• Le mutazioni in NCF4 sono associate alla malattia granulomatosa cronica (CGD), caratterizzata da infezioni ricorrenti dovute alla produzione difettosa di superossido.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Verificare la fosfo-specificità preincubando l'anticorpo con peptide non fosforilato o trattando i lisati cellulari con fosfatasi; la perdita del segnale conferma la dipendenza dalla fosforilazione.
• Per Western blot, ottimizzare la diluizione dell'anticorpo utilizzando un controllo positivo come lisati di neutrofili stimolati con estere di forbolo o cellule HL-60; includere inibitori di fosfatasi nei buffer di lisizzazione per preservare la fosforilazione.
• In ELISA, rivestire con l'immunogeno peptide fosforilato e confrontare il legame con la controparte non fosforilata per valutare la specificità.
• Considerare la rimozione del campione dalla membrana e il riprobing con un anticorpo anti-NCF4 totale per normalizzare i livelli di fosforilazione rispetto all'abbondanza proteica.

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