Anti-Fosfo-NF-kB p65/RelA-S311 Coniglio pAb per WB, ELISA - Q04206

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione del Fattore di Trascrizione p65

• NF-kappa-B è un fattore di trascrizione pleiotropico presente in quasi tutti i tipi cellulari, funzionando come punto finale di varie cascate di trasduzione del segnale. Forma omodimeri o eterodimeri; il complesso eterodimerico RELA-NFKB1 è il più abbondante e agisce come attivatore trascrizionale.
• RELA (p65) si lega ai siti kappa-B nei promotori dei geni bersaglio con affinità e specificità distinte per dimero, attivando direttamente la trascrizione e modulando indirettamente l'accessibilità della cromatina ad altri fattori.
• Nelle cellule non stimolate, i complessi NF-kappa-B vengono mantenuti inattivi nel citoplasma dagli inibitori I-kappa-B. Dopo stimolazione, I-kappa-B viene fosforilato dalle IKK e degradato, rilasciando RELA per translocare nel nucleo e avviare l'espressione genica.
• RELA è soggetto a estese modificazioni post-traduzionali—inclusa la fosforilazione a più siti (es. S311), acetilazione, metilazione e ubiquitinazione—che regolano la sua attività, stabilità e interazioni proteiche.
• Essenziale per l'espressione dei geni delle citochine nelle cellule T, evidenziando il suo ruolo critico nelle risposte immunitarie adattative.
  Riferimenti correlati: PMID:15790681
• Identificato come un fattore di trascrizione chiave che governa la risposta all'interferone durante l'infezione da SARS-CoV-2. Riferimenti correlati: PMID:33440148
• La localizzazione subcellulare è prevalentemente citoplasmatica in condizioni di riposo a causa del mascheramento del segnale di localizzazione nucleare da parte di I-kappa-B; l'accumulo nucleare avviene rapidamente dopo l'attivazione.
• Annotato con parole chiave tra cui Fosfoproteina, Acetilazione, Metilazione, Coniugazione Ubl, Legame isopeptidico e S-nitrosilazione, riflettendo l'intricato network di controllo di questo master fattore di trascrizione.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno, un fosfo-peptide sintetico che copre S311, è progettato per generare anticorpi specifici per la forma fosforilata. Verificare la specificità fosforilata trattando i lisati con lambda fosfatasi prima del WB.
• Applicazioni adatte secondo il fornitore: WB ed ELISA. Per WB, utilizzare 20–30 µg di lisato cellulare totale e un tampone di blocco standard; convalidare la dimensione della banda attorno ai 60 kDa con controlli positivi appropriati (es. cellule HeLa stimolate con TNF-α).
• Per ELISA, considerare il rivestimento con il fosfo-peptide e l'utilizzo della sua controparte non fosforilata come controllo negativo per confermare il legame sito-specifico.
• Reagisce con l'umano e il mouse; eseguire la convalida iniziale nelle linee cellulari o tessuti rilevanti di queste specie. L'induzione della segnalazione NF-kB con stimoli come TNF-α o PMA/ionomicina è raccomandata per potenziare i segnali di fosforilazione.
• Evitare stripping di membrana aggressivo che potrebbe alterare lo stato di fosforilazione; utilizzare invece tamponi a pH basso o con detergenti lievi se è necessaria una nuova ibridazione.

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