Anticorpo monoclonale coniglio Anti-Fosfo-NF-kB p65/RelA (Ser468) per WB, IP, ELISA - Q04206

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NF-kB p65/RelA

• Il fattore di trascrizione p65 (RelA) è la subunità p65 del complesso del fattore di trascrizione NF-kB, un fattore pleiotropico presente in quasi tutti i tipi cellulari che rappresenta l’endpoint di vie di trasduzione del segnale attivate da numerosi stimoli correlati all’infiammazione, all’immunità, alla differenziazione, alla crescita cellulare, alla tumorigenesi e all’apoptosi.
• NF-kB funziona come omodimero o eterodimero di proteine contenenti il dominio Rel. La forma più abbondante è l’eterodimero RELA-NFKB1 (p65-p50). Questi dimeri legano i siti DNA kappa-B con affinità diverse: i complessi RELA-NFKB1 e RELA-REL agiscono come attivatori della trascrizione.
• L’attività di NF-kB è regolata da molteplici meccanismi, tra cui modifiche post-traduzionali, compartimentalizzazione subcellulare e interazioni con cofattori o corepressori. NF-kB inattivo è trattenuto nel citoplasma dalle proteine inibitrici I-kB; dopo la fosforilazione mediata da IKK e la degradazione di I-kB, il complesso NF-kB viene rilasciato e si trasloca nel nucleo.
• RELA possiede un’affinità intrinseca bassa per il legame al DNA, ma contribuisce alla capacità di legame al DNA del complesso NF-kB. Modula inoltre l’accessibilità della cromatina ai promotori bersaglio, influenzando indirettamente l’espressione genica.
• RELA è essenziale per l’espressione genica delle citochine nei linfociti T, svolgendo un ruolo fondamentale nelle risposte immunitarie adattative. Riferimenti correlati: PMID:15790681
• Durante l’infezione da SARS-CoV-2, RELA agisce come fattore di trascrizione chiave che regola la risposta all’interferone, sottolineando il suo ruolo nell’immunità innata antivirale. Riferimenti correlati: PMID:33440148
• A livello subcellulare, RELA si sposta tra citoplasma e nucleo. È soggetto a estese modifiche post-traduzionali, tra cui acetilazione, metilazione, fosforilazione (ad esempio, in Ser468, bersaglio di questo anticorpo), S-nitrosilazione e coniugazione ubiquitino-simile, che modulano la sua attività, stabilità e interazioni.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Per Western blot (WB), preparare i lisati utilizzando buffer RIPA integrato con inibitori di proteasi e fosfatasi per preservare il segnale di fosforilazione in Ser468. Eseguire SDS-PAGE e trasferimento, quindi incubare con l’anticorpo a una diluizione determinata empiricamente.
• Negli esperimenti di immunoprecipitazione (IP), verificare che il livello di espressione della proteina bersaglio sia sufficiente nel lisato di cellule o tessuto. L’origine di coniglio e la natura monoclonale dell’anticorpo possono facilitare una cattura pulita con reagenti secondari corrispondenti per specie.
• Per la rilevazione basata su ELISA, valutare l’utilizzo dell’anticorpo come reagente di cattura o di rilevazione, convalidando linearità e specificità nel vostro sistema di analisi con appropriati controlli fosfo-specifici.
• Poiché l’anticorpo mostra reattività crociata con uomo, topo e ratto, può essere utilizzato per studi comparativi tra queste specie. Tuttavia, verificare sempre le prestazioni includendo controlli positivi e negativi per ogni specie e condizione di trattamento.
• Ottimizzare la concentrazione dell’anticorpo per ogni applicazione e tipo di campione, poiché le diluizioni consigliate possono variare in base alle condizioni sperimentali e ai metodi di rilevazione.

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