Anticorpo policlonale rabbit Anti-Fosfo-NF-kB p65/RelA-T435 per WB e ELISA - Q04206

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NF-kB p65/RelA

• Codificato dal gene RELA, NF-kB p65 (noto anche come RelA) è una subunità del complesso del fattore di trascrizione NF-kB, che svolge un ruolo centrale nella regolazione delle risposte immunitarie, dell'infiammazione, della proliferazione cellulare e dell'apoptosi.
• NF-kB funziona come omodimero o eterodimero; l'eterodimero RELA-NFKB1 è la forma più abbondante, ma anche l'omodimero RELA-RELA può attivare la trascrizione a livello di promotori di geni bersaglio specifici.
• Nelle cellule non stimolate, i dimeri di NF-kB sono sequestrati nel citoplasma dalle proteine inibitrici di kB (IkB); dopo la stimolazione, IkB viene fosforilato da IKK e degradato, permettendo a NF-kB di traslocare nel nucleo e attivare l'espressione genica.
• RELA è essenziale per l'espressione genica di citochine nei linfociti T, contribuendo alle risposte immunitarie adattative. Riferimenti correlati: PMID:15790681
• È stato identificato come il fattore di trascrizione chiave che regola la risposta all'interferone durante l'infezione da SARS-CoV-2. Riferimenti correlati: PMID:33440148
• RELA è soggetto a estese modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione (ad esempio in Thr435), acetilazione, metilazione e altre, che modulano la sua attività trascrizionale e le sue interazioni.
• La proteina si localizza principalmente nel citoplasma nello stato inattivo e nel nucleo dopo l'attivazione, dove lega il DNA e recluta coattivatori.
• Lo splicing alternativo e i riarrangiamenti cromosomici che coinvolgono RELA sono stati associati a determinate patologie, a conferma della sua importanza sia nella fisiologia normale che in quella patologica.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno utilizzato per produrre questo anticorpo è un peptide fosforilato sintetico intorno alla posizione Thr435, pertanto riconosce specificamente la forma fosforilata di p65. Per la WB, assicurarsi che i lisati cellulari siano preparati con inibitori delle fosfatasi per preservare lo stato di fosforilazione.
• Durante l'esecuzione dell'ELISA, si consiglia di utilizzare sia peptidi fosforilati che non fosforilati per verificare la fosfo-specificità dell'anticorpo.
• Per il western blotting, è prevista una banda intorno a 60 kDa; eseguire la convalida utilizzando controlli positivi noti per avere NF-kB attivato (ad esempio, cellule trattate con TNF-alfa) e controlli negativi (ad esempio, lisati non trattati o trattati con fosfatasi).
• L'anticorpo reagisce con campioni umani e murini; se necessario, la reattività incrociata con altre specie deve essere valutata sperimentalmente.
• Ottimizzare le diluizioni dell'anticorpo primario in base al proprio sistema di campioni; i punti di partenza tipici sono 1:500-1:2000 per la WB, ma le condizioni esatte possono variare.

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