Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Fosfo-NF-κB2-S866 per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - Q00653

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di NF-κB2 p100/p52

• NF-κB2 codifica per la proteina precursore p100, che viene elaborata proteoliticamente per generare la subunità attiva p52; viene espressa anche l'isoforma p49. p100 può trattenere i complessi NF-κB nel citoplasma.
• NF-κB è un fattore di trascrizione pleiotropo che regola l'infiammazione, l'immunità, la differenziazione cellulare, la crescita, la tumorigenesi e l'apoptosi.
• p52 forma omodimeri o eterodimeri con altri membri della famiglia NF-κB/Rel (RELA/p65, RELB, NFKB1/p50, REL) e si lega alla sequenza consenso κB 5'-GGRNNYYCC-3' nei potenziatori dei geni bersaglio.
• Il complesso eterodimerico RelB-p52 funziona come attivatore trascrizionale, mentre l'omodimero p52-p52 agisce come repressore.
• Nella via non canonica di NF-κB, l'omodimero CHUK/IKKA attivato da MAP3K14 fosforila p100 associato a RelB, innescando l'elaborazione dipendente dall'ubiquitina a p52 e la translocazione nucleare.
• NF-κB2 è localizzato sia nel citoplasma che nel nucleo, con la compartimentazione subcellulare e le modifiche post-traduzionali (fosforilazione, ubiquitinazione) che controllano strettamente la sua attività.
• p52, in concerto con RELB, regola l'orologio circadiano reprimendo l'attività di attivatore trascrizionale dell'eterodimero CLOCK-BMAL1.
• I riarrangiamenti cromosomici che coinvolgono NFKB2 sono associati a determinate malignità linfoidi.

Guida Sperimentale e Suggerimenti Tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico che comprende Ser866; pertanto, ci si aspetta che l'anticorpo riconosca specificamente NF-κB2 solo quando è fosforilato a questo residuo. Utilizzare inibitori delle fosfatasi durante la preparazione del campione per preservare la fosforilazione.
• Per il Western blotting, il peso molecolare previsto di p100 è di ~97 kDa; tuttavia, potrebbero essere osservate più bande a causa di intermedi di elaborazione o degradazione. Si consiglia di includere appropriati controlli positivi e negativi (ad es., lisati trattati con fosfatasi).
• Per immunochimica (IHC-P) e immunofluorescenza (IF/ICC), potrebbe essere necessaria l'ottimizzazione dei passaggi di recupero dell'antigene, permeabilizzazione e blocco. Le prestazioni dell'anticorpo devono essere validate nel tessuto o sistema cellulare pertinente.
• Nelle applicazioni ELISA, l'anticorpo fosfo-specifico può essere abbinato a un anticorpo di cattura che riconosce l'NF-κB2 totale per quantificare i livelli della proteina fosforilata.
• È riportata la reattività incrociata con il mouse, ma la reattività con altre specie non è stata testata; si consiglia un'ulteriore validazione se si utilizzano campioni non umani/non murini.

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