Anticorpo policlonale di coniglio Anti-Fosfo-NFKB1-S893 per IF/ICC - P19838

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NFKB1

• NF-κB è un fattore di trascrizione pleiotropico che regola un'ampia gamma di processi biologici, tra cui infiammazione, immunità, differenziazione, crescita cellulare, tumorigenesi e apoptosi, ed è espresso in quasi tutti i tipi cellulari.
• Il gene NFKB1 codifica per la proteina precursore p105, che svolge una doppia funzione: agisce come fattore di ritenzione citoplasmatica per i complessi NF-κB e subisce una lavorazione cotraduzionale per generare la subunità attiva p50.
  Riferimenti correlati: PMID:1423592
• La subunità attiva p50 forma eterodimeri principalmente con RELA/p65 per formare il complesso NF-κB transcriptionalmente competente, che lega la sequenza consenso κB del DNA 5'-GGRNNYYCC-3' nelle regioni enhancer di geni coinvolti nelle risposte immunitarie e di fase acuta.
  Riferimenti correlati: PMID:1740106, PMID:7830764
• A seconda della composizione del dimero, i complessi NF-κB possono agire come attivatori trascrizionali (ad esempio p65-p50) o repressori (ad esempio omodimeri p50-p50), garantendo una regolazione fine dell'espressione genica.
• Nelle cellule non stimolate, NF-κB è sequestrato nel citoplasma dalle proteine inibitrici IκB; dopo l'attivazione da parte di diversi stimoli, IκB viene fosforilato e degradato, consentendo la traslocazione di NF-κB nel nucleo.
• La proteina NFKB1 è soggetta a estese modifiche post-traduzionali, tra cui fosforilazione, acetilazione, idrossilazione, S-nitrosilazione e ubiquitinazione, che regolano la sua attività, stabilità e interazioni proteiche.
• La fosforilazione della serina 893 (S893) avviene all'interno del dominio C-terminale simile a IκB di p105, una regione che viene tipicamente rimossa durante la lavorazione proteasomale per formare p50, suggerendo un ruolo regolatorio nella ritenzione citoplasmatica o nella dinamica di lavorazione di p105.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un fosfopetide sintetico corrispondente ai residui intorno a S893 di NFKB1 umano, il che indica che l'anticorpo riconosce specificamente la forma fosforilata di NFKB1 in questo sito.
• Per l'immunocitochimica/immunofluorescenza (ICC/IF), raccomandiamo l'uso di appropriati protocolli di fissazione e permeabilizzazione che preservino lo stato di fosforilazione. La fissazione con metanolo o paraformaldeide può essere adatta; tuttavia, effettuare prove con e senza inibitori della fosfatasi.
• Verificare la specificità dell'anticorpo pre-incubando l'anticorpo con l'immunogeno fosfopetidico o trattando le cellule con una fosfatasi prima della colorazione.
• Si noti che il sito di fosforilazione S893 risiede nel dominio C-terminale simile a IκB di p105. Questo dominio viene degradato durante la lavorazione proteasomale che genera la subunità matura p50. Pertanto, ci si aspetta che l'anticorpo rilevi la forma fosforilata di p105 (~105 kDa) e non il prodotto tagliato p50.
• Poiché la reattività incrociata è stata dimostrata solo per l'uomo, convalidare l'anticorpo nelle linee cellulari o nei tessuti umani pertinenti. I livelli di espressione possono variare tra i tipi cellulari e le condizioni di stimolazione.

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