Anticorpo policlonale Anti-Fosfo-NMDAR1 (S896/S896) per WB, ELISA - Q05586

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di NMDAR1 (GluN1)

• Codificata dal gene GRIN1, la proteina GluN1 (chiamata anche NR1, NMDAR1) è la subunità obbligatoria dei recettori NMDA, essenziali per la neurotrasmissione eccitatoria nel sistema nervoso centrale.
• I recettori NMDA formano canali cationici eterotetramerici dipendenti da ligando con elevata permeabilità al calcio e blocco del magnesio voltaggio-dipendente, contribuendo alla plasticità sinaptica, all'apprendimento e alla memoria (PubMed:21376300, PubMed:26875626, PubMed:26919761). Riferimenti correlati: PMID:21376300 PMID:26875626 PMID:26919761
• La subunità GluN1 si assembla con le subunità GluN2 (A-D) o GluN3 (A-B) per formare recettori NMDA funzionali; diverse composizioni di subunità conferiscono proprietà farmacologiche e cinetiche distinte al canale (PubMed:26875626, PubMed:26919761, PubMed:36309015). Riferimenti correlati: PMID:26875626 PMID:26919761 PMID:36309015
• L'attivazione del canale richiede il legame simultaneo di L-glutammato alla subunità GluN2 e di glicina o D-serina alla subunità GluN1, oltre alla depolarizzazione della membrana per rimuovere il blocco di Mg²⁺ voltaggio-dipendente; questo permette l'influsso di Ca²⁺ e Na⁺ e l'efflusso di K⁺ (PubMed:21376300, PubMed:26875626, PubMed:26919761). Riferimenti correlati: PMID:21376300 PMID:26875626 PMID:26919761
• Il dominio C-terminale di GluN1 è soggetto a estese modifiche post-traduzionali, inclusa la fosforilazione dei residui Ser896 e Ser897, che può modulare il traffico e la funzione del recettore.
• I recettori NMDA sono localizzati prevalentemente sulla membrana della densità postsinaptica delle sinapsi eccitatorie, posizionandoli al centro della segnalazione sinaptica e della plasticità.
• Le mutazioni nel gene GRIN1 sono associate a disturbi del neurosviluppo, tra cui epilessia, disabilità intellettiva e encefalopatia epilettica e dello sviluppo (DEE101), evidenziando il ruolo critico di GluN1 nella funzionalità cerebrale.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Poiché questo anticorpo riconosce la fosforilazione in S896/S897, aggiungere inibitori di fosfatasi durante la preparazione del campione per preservare l'epitopo fosforilato.
• Per western blotting, il peso molecolare previsto di NMDAR1 è ~105 kDa; utilizzare una percentuale di gel appropriata (es. 8–10% di SDS-PAGE) e condizioni di trasferimento adatte per proteine ad alto peso molecolare.
• Validare la specificità tramite saggi di competizione peptidica: preincubare l'anticorpo con il peptide immunogeno fosforilato o un peptide non fosforilato per confermare il riconoscimento fosfo-specifico.
• Per ELISA, l'anticorpo può essere utilizzato con il peptide fosforilato come antigene di rivestimento; ottimizzare la concentrazione di rivestimento e le condizioni di rilevazione.
• Si consiglia di utilizzare lisati di controllo positivo provenienti da tessuto cerebrale di uomo, topo o ratto o linee cellulari neuronali note per esprimere NMDAR1.
• La reattività crociata con uomo, topo e ratto indica che l'epitopo è conservato; tuttavia, eseguire sempre la validazione nella specie e nel sistema modello di interesse.

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