Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-Fosfo-PAK1/2/3 (S144/S141/S139) per WB e ELISA - Q13153 / Q13177 / O75914

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PAK1

• PAK1 (p21-activated kinase 1, alpha-PAK) è una serina/treonina protein chinasi che, insieme a PAK2 e PAK3, appartiene alla famiglia PAK. Questo anticorpo riconosce la forma fosforilata del residuo serina conservato equivalente a S144 in PAK1, S141 in PAK2 e S139 in PAK3, che sono fondamentali per l'attivazione della chinasi.
• Attivato dalle GTPasi Rho CDC42 e RAC1, PAK1 collega i segnali extracellulari alle vie intracellulari che controllano la dinamica del citoscheletro, l'adesione cellulare e la migrazione.
  Riferimenti correlati: PMID:8805275 PMID:9528787
• PAK1 riorganizza il citoscheletro di actina promuovendo la formazione di fibre di stress e adesioni focali, regolando di conseguenza la forma e la motilità cellulare.
  Riferimenti correlati: PMID:9032240 PMID:9395435
• La chinasi regola l'apoptosi attraverso la fosforilazione di RAF1, che a sua volta fosforila BAD e promuove il suo sequestro mitocondriale.
  Riferimenti correlati: PMID:11733498
• Subcellularmente, PAK1 si localizza nel citoplasma, nelle giunzioni cellulari, nei lamellipodi, nelle membrane ruffliate, negli invadopodi, nel nucleo e nel centrosoma, in linea con i suoi molteplici ruoli nella segnalazione e nella struttura cellulare.
• Le modifiche post-traduzionali includono l'autofosforilazione su più residui di serina/treonina (inclusa S144) e l'acetilazione, che modulano attività e localizzazione.
• Clinicamente, PAK1 è sovraespresso nel cancro gastrico, dove promuove l'invasione e la migrazione, ed è stato associato a disturbi neurologici.
  Riferimenti correlati: PMID:25766321

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Per il Western blotting, utilizzare miscele di inibitori di proteasi e fosfatasi durante la lisisi di cellule/tessuti per preservare lo stato di fosforilazione. La banda attesa per PAK1 è di circa 65 kDa, ma possono verificarsi leggere variazioni di dimensione tra specie o a causa di modifiche post-traduzionali.
• La specificità del segnale fosforilato può essere confermata trattando i campioni con λ-fosfatasi o tramite saggi di competizione peptidica utilizzando il peptide immunogeno non fosforilato.
• In ELISA, utilizzare un peptide fosforilato corrispondente all'immunogeno come antigene di rivestimento e includere controlli appropriati (peptide non fosforilato, bianco) per valutare la specificità dell'anticorpo.
• Poiché l'anticorpo riconosce un sito fosforilato conservato condiviso da PAK1/2/3, si consiglia di verificare l'identità dell'isoforma nel proprio sistema utilizzando anticorpi PAK totali specifici per l'isoforma o il knockdown tramite siRNA.

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