Anticorpo monoclonale rabbit Anti-Fosfo-PAK2 (S20) per WB, ELISA - Q13177

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PAK2

• La serina/treonina-protein chinasi PAK2, nota anche come PAK65, Gamma-PAK o p58, è un membro della famiglia delle chinasi attivate da p21 (PAK).
• Agisce come effettore a valle delle piccole GTPasi CDC42 e RAC1; il legame induce autofosforilazione e attivazione della chinasi. Riferimenti correlati: PMID:7744004
• Fosforila diversi substrati, tra cui l'istone H4 per promuovere l'assemblaggio del nucleosoma, JUN per la proliferazione indotta da EGF e MAPK4/6 per regolare la polimerizzazione dell'actina F. Riferimenti correlati: PMID:21724829, PMID:21177766, PMID:21317288
• La clivaggio mediato dalla caspasi genera PAK-2p34, che si trasloca nel nucleo e promuove l'apoptosi tramite la segnalazione JNK; fosforila anche MKNK1 per ridurre la traduzione cellulare. Riferimenti correlati: PMID:12853446, PMID:16617111, PMID:9171063, PMID:15234964
• Si localizza nel citoplasma, nel nucleo, nella regione perinucleare e sulla membrana, ed esercita funzioni indipendenti dalla chinasi nell'orientamento del fuso mitotico quando è associato a ARHGEF7 e GIT1. Riferimenti correlati: PMID:19273597, PMID:19923322
• È espresso ubiquitariamente con livelli più elevati nel muscolo scheletrico, ovaio, timo e milza; viene modificato post-traduzionalmente tramite acetilazione, miristoilazione e coniugazione con ubiquitina.
• Fosforila e inibisce anche CASP7, prevenendo l'apoptosi. Riferimenti correlati: PMID:21555521, PMID:27889207

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Poiché l'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico corrispondente alla regione della serina 20, si prevede che questo anticorpo riconosca specificamente PAK2 fosforilata sul sito S20; si consiglia di utilizzare inibitori della fosfatasi durante la preparazione dei campioni per preservare la fosforilazione.
• Per Western blot, eseguire la validazione in linee cellulari umane che esprimono PAK2 e confermare la banda a ~58 kDa; la reattività crociata con topo e ratto permette studi in queste specie, ma è necessario verificare l'omologia della sequenza intorno al sito S20.
• In ELISA, utilizzare un controllo di peptide non fosforilato per verificare la fosfo-specificità.
• Includere controlli appropriati (ad esempio, lisati non trattati vs lisati trattati con fosfatasi) per confermare la dipendenza dalla fosforilazione.
• Le diluizioni di lavoro ottimali devono essere determinate empiricamente; iniziare con le raccomandazioni del produttore, se disponibili.

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