Anticorpo monoclonale di coniglio anti-Fosfo-PERK (T982) per WB, IHC-P, ELISA - Q9NZJ5

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di PERK

• EIF2AK3/PERK è una chinasi sensore dello stress metabolico che fosforila eIF2-alfa (EIF2S1) su Ser51 in risposta allo stress del reticolo endoplasmatico (RE), un passo centrale nella risposta a proteine mal ripiegate (UPR).
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• La fosforilazione di eIF2-alfa da parte di PERK inibisce la traduzione globale cap-dipendente mentre migliora selettivamente la traduzione di mRNA responsivi allo stress come ATF4 e QRICH1, consentendo la riprogrammazione cellulare sotto stress.
  Riferimenti correlati: PMID:10026192, PMID:10677345, PMID:31023583
• L'UPR mediata da PERK potenzia la fosforilazione ossidativa mitocondriale promuovendo l'espressione dipendente da ATF4 di COX7A2L/SCAF1, che aumenta la formazione di supercomplessi della catena respiratoria.
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• PERK è inibita nei siti di contatto mitocondri-RE da ATAD3A, proteggendo i mitocondri dall'arresto traduzionale globale dell'UPR.
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• Oltre a eIF2-alfa, PERK fosforila anche NFE2L2/NRF2, innescandone il rilascio da KEAP1 e il successivo accumulo nucleare per attivare l'espressione genica antiossidante.
• PERK è una proteina transmembrana residente nel RE ed è espressa in modo ubiquitario, con livelli più alti nei tessuti secretori.
• La proteina ha un peso molecolare di ~125 kDa e appartiene alla famiglia delle proteina chinasi Ser/Thr, con ulteriore attività tirosina-chinasica.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Questo anticorpo è stato generato contro un fosfopeptide sintetico corrispondente al sito di fosforilazione Thr982 della PERK umana; riconosce specificamente la PERK fosforilata e non rileverà la forma non fosforilata. Verificare la fosfo-specificità nel vostro sistema sperimentale, ad esempio mediante trattamento con fosfatasi.
• Per il western blot (WB), ci si aspetta una banda di circa 125 kDa. Ottimizzare il blocco e la diluizione dell'anticorpo per minimizzare il legame aspecifico e considerare di caricare controlli appropriati (ad esempio, lisati cellulari indotti da stress vs. non stressati).
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), le condizioni di recupero dell'antigene possono influenzare la colorazione; validare con campioni tissutali positivi e negativi noti e considerare l'uso di un protocollo di rilevamento fosfo-specifico.
• L'anticorpo reagisce in modo incrociato con la PERK di topo e ratto, consentendo studi traslazionali; tuttavia, confermare la reattività nei vostri specifici tessuti o linee cellulari, poiché lo stato di fosforilazione può variare.
• Per applicazioni ELISA, questo anticorpo può essere utilizzato come reagente di rilevamento o di cattura, ma le condizioni del saggio (rivestimento, blocco, metodo di rilevamento) devono essere ottimizzate per il rilevamento fosfo-specifico.

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