Anticorpo policlonale coniglio anti-Fosfo-PKC alfa (S319) per WB e ELISA - P17252

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PKC alfa

• PKC alfa è una chinasi serina/treonina dipendente da calcio, DAG e fosfolipidi (gene PRKACA) che agisce come regolatore chiave della proliferazione cellulare, della differenziazione e dell'apoptosi.
• Modula la via MAPK/ERK fosforilando RAF1 ed esercita effetti anti-apoptotici attraverso la fosforilazione di BCL2 e la soppressione di IGFBP3 indotta da p53/TP53.
• PKC alfa gioca un duplice ruolo nel cancro: promuove la tumorigenesi nei gliomi e nei tumori al seno, ma induce l'arresto del ciclo cellulare nelle cellule intestinali.
• Nel sistema cardiovascolare, fosforila la troponina cardiaca T (TNNT2), riducendo la sensibilità al calcio dei filamenti di miofilamento e la contrattilità miocardica, e promuove l'angiogenesi e l'aggregazione piastrinica.
• Durante la migrazione delle cellule T diretta dalle chemochine, PKC alfa fosforila DOCK8, portando alla sua dissociazione da LRCH1 e all'attivazione di CDC42 (PubMed:28028151). Riferimenti correlati: PMID:28028151
• Fosforila KLHL3 in risposta all'angiotensina II, modulando le interazioni WNK4 e il trasporto ionico (PubMed:25313067). Riferimenti correlati: PMID:25313067
• PKC alfa attiva LRRK1, che fosforila le proteine RAB, regolando così il traffico intracellulare di vescicole (PubMed:36040231). Riferimenti correlati: PMID:36040231
• La proteina si sposta tra il citoplasma, la membrana plasmatica, il mitocondrio e il nucleo; la sua localizzazione principalmente citosolica viene alterata upon attivazione, con la fosforilazione che è un meccanismo regolatore chiave.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico corrispondente a Ser319. Pertanto, si prevede che questo anticorpo riconosca specificamente la forma fosforilata di PKC alfa; convalidare la specificità nel proprio sistema di campione confrontando i segnali tra lisati stimolati e non stimolati o utilizzando un trattamento con fosfatasi.
• Per il Western blotting, considerare il caricamento di lisati cellulari totali da linee cellulari umane, di topo o di ratto note per esprimere PKC alfa, e utilizzare condizioni di blocco e lavaggio appropriate per minimizzare il legame non specifico.
• Nell'ELISA, assicurarsi che il tampone di rivestimento dell'antigene e la concentrazione siano ottimizzati; l'anticorpo può essere utilizzato per il rilevamento di fosfo-peptidi in formati competitivi o diretti.
• Includere sempre controlli positivi e negativi appropriati (ad es. cellule stimolate vs non trattate) per il rilevamento fosfo-specifico.

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