mAb coniglio anti-Fosfo-PKC alfa-T638 per WB, ELISA - P17252

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione della PKC alfa

• La protein chinasi C di tipo alfa (PKCα) è una serina/treonina protein chinasi dipendente da calcio, fosfolipidi e diacilglicerolo (DAG) che regola diversi processi cellulari: proliferazione, apoptosi, differenziazione, migrazione, adesione e angiogenesi.
• La PKCα opera sia nella regolazione positiva che negativa della progressione del ciclo cellulare; può promuovere la crescita tramite la segnalazione RAF1/MAPK/ERK o indurre l'arresto del ciclo cellulare tramite l'iperfosforilazione di RB1 e l'induzione degli inibitori delle CDK (CDKN1A, CDKN1B).
• La chinasi svolge funzioni anti-apoptotiche nelle cellule tumorali sopprimendo l'attivazione di IGFBP3 mediata da p53/TP53 e fosforilando BCL2, contribuendo quindi alla promozione tumorale in gliomi e tumori della mammella.
• La PKCα svolge un ruolo fondamentale nella biologia cardiovascolare: regola negativamente la contrattilità miocardica, induce l'ipertrofia dei cardiomiociti tramite la segnalazione ERK1/2 e promuove l'angiogenesi aumentando la migrazione delle cellule endoteliali e la proliferazione indotta da VEGFA.
• Nella funzione piastrinica, la PKCα media il rilascio delle granule dipendente da CD36/GP4 e l'attivazione dell'integrina ITGA2B-ITGB3 tramite la via RAP1GAP, contribuendo alla formazione del trombo.
• La chinasi è coinvolta nelle risposte immunitarie, inclusa la differenziazione dei macrofagi e la migrazione dei linfociti T indotta dalle chemochine; fosforila DOCK8 per regolare l'attivazione di CDC42. Riferimenti correlati: PMID:28028151
• La localizzazione subcellulare della PKCα è dinamica: si trova nel citoplasma, nella membrana cellulare, nella membrana mitocondriale e nel nucleo, a seconda dello stato di attivazione e degli stimoli.
• La PKCα fosforila una vasta gamma di substrati, tra cui TNNT2/CTNT (regola la contrattilità cardiaca), KLHL3 (modula la stabilità di WNK4 in risposta all'angiotensina II) e LRRK1 (coinvolta nel traffico intracellulare). Riferimenti correlati: PMID:25313067 PMID:36040231

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico che comprende la posizione Thr638 della PKCα umana; la specificità dell'anticorpo per la forma fosforilata deve essere convalidata confrontando i segnali dei campioni trattati con fosfatasi e quelli non trattati.
• Per Western blot, si consiglia di utilizzare gel SDS-PAGE a bassa percentuale per separare la proteina di 77 kDa e includere controlli di carico appropriati insieme ad anticorpi PKCα non fosfo-specifici per valutare i livelli proteici totali.
• Nelle applicazioni ELISA, studiare empiricamente le concentrazioni dell'antigene di rivestimento e le condizioni di bloccaggio; un test di competizione con fosfopeptide può aiutare a confermare il legame fosfo-specifico.
• Poiché l'attivazione della PKCα è transiente e dipendente dallo stimolo, ottimizzare i protocolli di stimolazione cellulare (ad es. PMA, fattori di crescita) e garantire una preparazione tempestiva dei campioni con inibitori delle fosfatasi.

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