Anticorpo policlonale Anti-Fosfo-POLR2A CTD-S2 per WB, IP, ELISA - P24928

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di POLR2A (sottounità RPB1 della RNA polimerasi II dipendente dal DNA)

• POLR2A codifica la sottounità più grande e catalitica della RNA polimerasi II (Pol II), una RNA polimerasi dipendente dal DNA responsabile della sintesi dei precursori di mRNA e di molti RNA non codificanti funzionali (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596, PubMed:28108474). Riferimenti correlati: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596 PMID:28108474
• Insieme alla seconda sottounità più grande POLR2B, forma il centro attivo della Pol II, aggiungendo nucleotidi all'RNA nascente e fornendo la correzione di bozze attraverso un'attività esonucleasica 3'->5' (PubMed:30190596, PubMed:8381534, PubMed:9852112). Riferimenti correlati: PMID:30190596 PMID:8381534 PMID:9852112
• L'unico dominio C-terminale (CTD) consiste di 52 ripetizioni tandem di eptapeptidi (YSPTSPS) e serve come piattaforma dinamica per l'assemblaggio di fattori che regolano l'inizio, l'allungamento, la terminazione della trascrizione e l'elaborazione co-trascrizionale dell'mRNA. La fosforilazione a Ser5 promuove il rilascio dal promotore, mentre la fosforilazione a Ser2 è critica per il rilascio dalla pausa e l'allungamento produttivo (PubMed:24207025, PubMed:26124092). Riferimenti correlati: PMID:24207025 PMID:26124092
• Oltre all'attività di RNA polimerasi dipendente dal DNA, POLR2A possiede la funzione di RNA polimerasi dipendente dall'RNA, estendendo RNA non codificanti e partecipando alla replicazione virale, ad esempio con il virus dell'epatite delta.
• Le modifiche post-traduzionali di POLR2A includono fosforilazione, acetilazione, metilazione e ubiquitinazione, che regolano finemente la sua attività e le sue interazioni.
• POLR2A si localizza prevalentemente nel nucleo ma può essere trovata anche nel citoplasma e associata ai cromosomi, riflettendo i suoi ruoli nella trascrizione e oltre.
• Il peso molecolare calcolato è di circa 217 kDa.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un fosfo-peptide sintetico corrispondente alla Ser2 della ripetizione CTD del POLR2A umano; la specificità dell'anticorpo dovrebbe essere confermata utilizzando lisati trattati con fosfatasi o un peptide di blocco non fosforilato.
• Per le applicazioni Western blot, includere inibitori appropriati della fosfatasi nei buffer di lisi e del campione per preservare il segnale di fosforilazione.
• Quando si esegue l'immunoprecipitazione, assicurarsi che la composizione del buffer di lisi mantenga l'integrità dell'epitopo fosforilato; la pre-pulizia dei lisati può ridurre il legame aspecifico.
• Per ELISA, la rivestimento con il fosfo-peptide immunizzante e il rilevamento con questo anticorpo possono essere utilizzati per valutare il legare specifico alla fosforilazione; considerare la reattività crociata con controlli di peptide non fosforilati.
• Questo anticorpo può anche riconoscere altre proteine con motivi fosforilati simili; validare nel sistema di campione pertinente.

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