Anticorpo policlonale di coniglio Anti-Fosfo-POLR2A CTD-S5 per WB, IHC-P, ELISA - P24928

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di POLR2A (RPB1)

• Essendo la subunità maggiore della RNA polimerasi II, POLR2A/RPB1 forma il nucleo catalitico responsabile della sintesi di RNA dipendente dal DNA, trascrivendo precursori di mRNA e RNA non codificanti (PubMed:23748380, PubMed:27193682, PubMed:30190596). Riferimenti correlati: PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596

• Insieme alla subunità POLR2B/RPB2, forma il centro attivo caratterizzato dal motivo DxDGD che coordina gli ioni Mg²⁺ e fornisce l'attività di proofreading esonucleasica 3'→5' per garantire la fedeltà della trascrizione (PubMed:30190596, PubMed:8381534, PubMed:9852112). Riferimenti correlati: PMID:30190596 PMID:8381534 PMID:9852112

• Il dominio C-terminale (CTD) è costituito da 52 ripetizioni tandem di eptapeptide (YSPTSPS) e subisce fosforilazione dinamica: la fosforilazione della Serina 5 (bersaglio di questo anticorpo) promuove l'uscita dal promotore, mentre la fosforilazione della Serina 2 favorisce l'allungamento e la processazione dell'mRNA (PubMed:24207025, PubMed:26124092). Riferimenti correlati: PMID:24207025 PMID:26124092

• Oltre al suo ruolo dipendente dal DNA, POLR2A possiede attività di RNA polimerasi dipendente dall'RNA, contribuendo al metabolismo degli RNA non codificanti e agendo come replicasi per il virus dell'epatite delta.

• Principalmente localizzato nel nucleo, POLR2A si sposta anche nel citoplasma e si associa ai cromosomi mitotici, riflettendo i suoi molteplici ruoli regolatori.

• Le mutazioni in POLR2A sono associate al disordine neurosviluppivo con ipotonia, disabilità intellettiva e tratti facciali caratteristici (NEDHIB), confermando il suo ruolo essenziale nello sviluppo umano.

• Le modifiche post-traduzionali del CTD, tra cui acetilazione e metilazione dei residui di lisina, forniscono un ulteriore livello di regolazione dell'espressione genica, con l'acetilazione che è cruciale per l'attivazione immediata dei geni precoci.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico progettato per riconoscere specificamente il residuo di Serina 5 fosforilato all'interno del contesto della ripetizione del CTD; la reattività crociata con il peptide non fosforilato o altri fosfo-epitopi (es. Ser2, Ser7) deve essere valutata nel sistema di campione corrispondente.
• Per l'analisi Western blot (WB), è previsto una banda principale a ~217 kDa corrispondente a POLR2A full-length; includere inibitori di fosfatasi nei buffer di lisi e elettroforesi per preservare il fosfo-epitopo.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), i metodi di recupero dell'antigene possono influenzare la stabilità del fosfo-epitopo; testare protocolli leggeri a base di citrato o EDTA e validare con controlli fosforilati positivi e negativi appropriati.
• Le applicazioni ELISA possono richiedere la copertura con peptide fosforilato e il blocco in condizioni che mantengano la specificità dell'anticorpo per l'antigene fosforilato.
• La reattività crociata è riportata per campioni di uomo, topo e ratto; tuttavia, poiché la sequenza della ripetizione del CTD è altamente conservata, verificare la specificità nel vostro organismo modello specifico tramite allineamento di sequenza se necessario.

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