pAb Rabbit Anti-POLR2A CTD-S7 Fosforilato per WB, IHC-P, ELISA, ChIP - P24928

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di POLR2A

• POLR2A, noto anche come RPB1 o POLR2, è la subunità maggiore dell'RNA polimerasi II (Pol II), una RNA polimerasi DNA-dipendente responsabile della sintesi dei precursori dell'mRNA e di numerosi RNA non codificanti funzionali.
• Forma il nucleo catalitico insieme alla seconda subunità maggiore POLR2B, utilizzando un motivo DxDGD che coordina il Mg²⁺ per la polimerizzazione dei nucleotidi e un'attività esonucleasica 3'→5' per la correzione degli errori. Riferimenti correlati: PMID:23748380, PMID:27193682, PMID:30190596, PMID:8381534, PMID:9852112
• Il dominio C-terminale (CTD) unico è costituito da 52 ripetizioni tandem di eptapeptide (YSPTSPS) e funge da piattaforma per i regolatori trascrizionali. La fosforilazione della Serina 5 facilita l'uscita dal promotore, mentre la fosforilazione della Serina 2 è necessaria per il rilascio dalla pausa e l'allungamento. Riferimenti correlati: PMID:24207025, PMID:26124092
• L'acetilazione delle lisine nel CTD attiva i geni immediati indotti dal fattore di crescita, mentre la metilazione e la dimetilazione reprimono l'espressione genica bersaglio, regolando in modo preciso la produzione trascrizionale. Riferimenti correlati: PMID:24207025, PMID:26124092
• POLR2A si localizza principalmente nel nucleo, ma viene rilevato anche nel citoplasma e sui cromosomi, coerentemente con il suo ruolo dinamico nella trascrizione.
• Agisce come RNA polimerasi RNA-dipendente che estende gli RNA non codificanti e può funzionare come replicasi per il virus dell'epatite delta.
• Le parole chiave associate a POLR2A includono fosfoproteina, acetilazione, metilazione, legame al DNA, legame ai metalli, trascrizione, interazione ospite-virus e variante patologica, che riflettono la sua regolazione complessa.
• Le mutazioni in POLR2A sono associate a disturbi del neurosviluppo come la disabilità intellettiva (NEDHIB).

Indicazioni Sperimentali e Consigli Tecnici

• Per il western blot, utilizzare un gel SDS-PAGE a bassa percentuale (es. 6% o gradiente) e un trasferimento umido per garantire un trasferimento efficiente della proteina di 217 kDa.
• Includere miscele di inibitori di fosfatasi nei buffer di lisi per preservare il segnale di fosforilazione della S7; considerare di utilizzare un peptide non fosforilato o un campione trattato con fosfatasi come controllo negativo.
• Nell'IHC-P, ottimizzare le condizioni di recupero dell'antigene (buffer a base di citrato o EDTA) e utilizzare un sistema di rilevazione polimerico per amplificare il segnale.
• Per l'ELISA, utilizzare il peptide fosforilato come controllo positivo e il corrispondente peptide non fosforilato per confermare la specificità.
• Nella ChIP, reticolare le proteine al DNA e frammentare la cromatina in frammenti di 200–500 bp; l'anticorpo può arricchire Pol II presso i promotori dei geni attivamente trascritti.
• Validare le prestazioni dell'anticorpo nella specie e nel contesto tissutale di interesse prima di esperimenti su larga scala.

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