Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-Fosfo-Raf1-S259 per WB e ELISA - P04049

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione della RAF1

• RAF1 (conosciuto anche come c-RAF o Raf-1) è una serina/treonina protein chinasi che rappresenta un collegamento regolatorio critico tra le Ras GTPasi legate alla membrana e la cascata di segnalazione MAPK/ERK a valle, controllando le decisioni del destino cellulare come proliferazione, differenziazione, apoptosi e sopravvivenza.
• Dopo l'attivazione, RAF1 fosforila e attiva le chinasi a doppia specificità MEK1/2, che a loro volta fosforilano ERK1/2, propagando segnali che regolano l'espressione genica e le risposte cellulari.
• RAF1 fosforilato (ad esempio, alle Ser-338 e Ser-339) fosforila direttamente la proteina pro-apoptotica BAD, promuovendo la sopravvivenza cellulare. Fosforila anche le adenilil ciclasi (ADCY2/5/6) e modula la fosfatasi PPP1R12A.
• RAF1 influisce su molteplici vie di segnalazione: può promuovere l'attivazione di NF-κB inibendo contemporaneamente effettori come ROCK2 (motilità), ASK1/MST2 (apoptosi) e RB1 (proliferazione/angiogenesi).
• In seguito a stimoli apoptotici, RAF1 può traslocare ai mitocondri, dove si lega a BCL2 e sposta BAD, fornendo un ulteriore meccanismo anti-apoptotico.
• RAF1 svolge un ruolo nella migrazione cellulare regolando la segnalazione di Rho ed è necessaria per la normale guarigione delle ferite. Contribuisce anche alla trasformazione oncogena attraverso la repressione trascrizionale delle proteine delle giunzioni strette come l'occludina (OCLN).
• La proteina è localizzata prevalentemente nel citoplasma e sulla membrana cellulare, ma in determinate condizioni può essere trovata anche nei mitocondri e nel nucleo.
• RAF1 è espressa in diversi tessuti; nel muscolo scheletrico l'isoforma 1 è più abbondante dell'isoforma 2.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico centrato sulla Ser259 della RAF1 umana (P04049). È previsto che l'anticorpo ottenuto riconosca specificamente RAF1 quando è fosforilata sulla Ser259; confermare la specificità confrontando i segnali tra campioni trattati con fosfatasi e non trattati.
• Per Western blot (WB), utilizzare un estratto proteico da cellule umane o di ratto note per esprimere RAF1. In condizioni riducenti dovrebbe essere osservata una banda a circa 73 kDa. Includere sempre controlli positivi e negativi appropriati (ad esempio, lisati di cellule starvation con siero vs stimolate con fattore di crescita).
• Per ELISA, titolare l'anticorpo contro l'immunogeno peptidico fosforilato e validare in una matrice biologica pertinente per garantire una rilevazione lineare. Considerare l'abbinamento con un anticorpo anti-RAF1 totale per normalizzare i livelli di fosforilazione.
• Poiché l'anticorpo viene fornito in sacchetti di ghiaccio, evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento e conservare alle condizioni consigliate per preservare l'attività.

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