Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Fosfo-Raf1 (S259) per WB, IP, ELISA - P04049

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di RAF1

• RAF1 (conosciuta anche come c-Raf o Raf-1) è una serina/treonina-protein chinasi che funge da collegamento regolatorio critico tra le GTPasi Ras associate alla membrana e la cascata di segnalazione MAPK/ERK, governando decisioni sul destino cellulare come proliferazione, differenziazione, apoptosi, sopravvivenza e trasformazione oncogenica.
• Dopo l'attivazione, RAF1 avvia una cascata di chinasi attivate da mitogeni (MAPK) attraverso la fosforilazione sequenziale delle chinasi MAPK a doppia specificità (MAP2K1/MEK1 e MAP2K2/MEK2) e delle chinasi regolate da segnali extracellulari (MAPK3/ERK1 e MAPK1/ERK2).
• RAF1 fosforila molteplici bersagli a valle, inclusi BAD (in Ser-75), adenilato ciclasi (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (inibendo l'attività fosfatasica) e TNNT2 (troponina T del muscolo cardiaco), modulando così l'apoptosi, la segnalazione cAMP e la funzione cardiaca.
• La proteina può promuovere l'attivazione di NF-kB e inibire trasduttori di segnale coinvolti nella motilità (ROCK2), apoptosi (MAP3K5/ASK1 e STK3/MST2), proliferazione e angiogenesi (RB1), evidenziando i suoi ampi ruoli regolatori.
• RAF1 è stata implicata nella trasformazione oncogenica delle cellule epiteliali attraverso la sovraregolazione del repressore trascrizionale SNAI2/SLUG, che reprime la proteina delle giunzioni strette occludina (OCLN), e limita l'attivazione delle caspasi in risposta alla stimolazione di Fas, all'apoptosi dei macrofagi mediata da patogeni e alla differenziazione eritroide.
• A livello subcellulare, RAF1 si trova nel citoplasma, nella membrana cellulare, nel mitocondrio e nel nucleo, con la traslocazione nei mitocondri che consente il legame con BCL2 e lo spostamento di BAD per proteggere le cellule dall'apoptosi.
• La proteina contiene un dominio zinc-finger, è soggetta a fosforilazione (inclusa quella in Ser259, che questo anticorpo riconosce) e svolge ruoli nella guarigione delle ferite, nella segnalazione Rho e nella migrazione.
• Nel muscolo scheletrico, l'isoforma 1 è più abbondante dell'isoforma 2; RAF1 è associata a malattie come la cardiomiopatia e la sordità (CMD1NN).

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico fosforilato che comprende la Ser259 di RAF1 umana. Questo design teoricamente mira all'epitopo fosforilato; tuttavia, gli utenti dovrebbero validare la fosfo-specificità confrontando i segnali tra lisati trattati con fosfatasi e non trattati nel loro sistema sperimentale.
• Poiché l'anticorpo è prodotto in coniglio contro un peptide umano, la reattività incrociata con altre specie non è garantita; validare nel sistema di campioni rilevante se si utilizzano modelli non umani.
• Per il Western blot (WB), ci si aspetta una banda intorno ai 73 kDa. Utilizzare condizioni di blocco e lavaggio appropriate per minimizzare il legame aspecifico e includere un controllo positivo (es. lisati cellulari stimolati) per confermare il rilevamento fosfo-specifico.
• Nell'immunoprecipitazione (IP) e nell'ELISA, l'anticorpo potrebbe funzionare come indicato; considerare l'ottimizzazione delle concentrazioni anticorpali e delle condizioni del tampone per il proprio saggio specifico.
• Evitare cicli ripetuti di congelamento-scongelamento; aliquottare e conservare a -20°C o come raccomandato.

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