Anticorpo monoclonale rabbit Anti-Fosfo-Raf1-S621 per WB, ELISA - P04049

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di RAF1 (c-Raf)

• RAF1 (conosciuta anche come c-Raf o Raf-1) è una serina/treonina protein chinasi che rappresenta un collegamento regolatorio critico tra le Ras GTPasi associate alla membrana e la cascata MAPK/ERK, funzionando come interruttore che controlla le decisioni sul destino cellulare tra cui proliferazione, differenziazione, apoptosi e sopravvivenza.
• La chinasi avvia una cascata delle proteine chinasi attivate da mitogeni (MAPK) fosforilando in sequenza le MAPK chinasi a doppia specificità (MAP2K1/MEK1 e MAP2K2/MEK2) e le chinasi regolate da segnali esterni (MAPK3/ERK1 e MAPK1/ERK2).
• RAF1 fosforila diversi substrati: BAD (alla Ser-75, tramite PAK1), adenilil ciclasi (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A (inibendo l'attività fosfatasi) e TNNT2; promuove inoltre l'attivazione di NF-κB e inibisce le chinasi ROCK2, ASK1 e MST2.
• La proteina protegge le cellule dall'apoptosi traslocandosi nei mitocondri, dove lega BCL2 e sposta BAD; limita inoltre l'attivazione delle caspasi in risposta alla stimolazione di Fas, all'apoptosi dei macrofagi mediata da patogeni e alla differenziazione eritroide.
• RAF1 contribuisce alla trasformazione oncogena tramite la repressione della occludina (OCLN), proteina delle giunzioni strette, inducendo l'aumento dell'espressione del repressore trascrizionale SNAI2/SLUG.
• La localizzazione subcellulare comprende citoplasma, membrana cellulare, mitocondrio e nucleo, a testimonianza dei suoi molteplici ruoli regolatori.
• La proteina presenta un dominio a dito di zinco, lega l'ATP ed è soggetta a fosforilazione (ad esempio S621), metilazione e splicing alternativo (l'isoforma 1 è più abbondante nel muscolo scheletrico).
• Le parole chiave associate a RAF1 comprendono cardiomiopatia, sordità, variante patologica, proto-oncogene e serina/treonina protein chinasi, che indicano il suo coinvolgimento sia nella fisiologia normale sia nella patologia.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico; assicurarsi di processare i campioni con inibitori di fosfatasi per preservare lo stato di fosforilazione durante la lisi e la preparazione.
• Per Western blotting, aspettarsi una banda a circa 73 kDa; includere controlli appropriati come lisati trattati con fosfatasi o cellule stimolate rispetto a non stimolate per confermare la fosfo-specificità.
• Poiché la fosforilazione di RAF1 è dinamica, si consiglia di utilizzare in parallelo un anticorpo contro RAF1 totale per normalizzare i segnali e interpretare correttamente i cambiamenti di attivazione.
• Per ELISA, ottimizzare la concentrazione dell'antigene di coating e la diluizione dell'anticorpo; una curva standard con un fosfo-peptide noto può facilitare la quantificazione.
• È riportata la reattività crociata con tessuto di ratto; validare le prestazioni dell'anticorpo nel vostro specifico sistema modello di ratto, poiché l'intensità del segnale può variare tra i campioni.

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