Anticorpo policlonale di coniglio Anti-Phospho-Raf1 (Ser621) - P04049

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di RAF1

• RAF1, noto anche come c-Raf o Raf-1, è una serina/treonina proteina chinasi codificata dal gene RAF1. Funge da collegamento regolatorio critico tra le GTPasi Ras associate alla membrana e la cascata di segnalazione MAPK/ERK, controllando processi cellulari chiave come proliferazione, differenziazione, apoptosi e trasformazione oncogena.
• RAF1 attivata fosforila e attiva le chinasi a doppia specificità MAP2K1/MEK1 e MAP2K2/MEK2, che a loro volta fosforilano le chinasi regolate da segnali extracellulari MAPK3/ERK1 e MAPK1/ERK2, propagando i segnali a valle.
• Oltre alla via MAPK canonica, RAF1 fosforila molteplici altri substrati, tra cui BAD (alla Ser-75), adenilil ciclasi (ADCY2, ADCY5, ADCY6), PPP1R12A e TNNT2, collegandola a diverse funzioni cellulari come la regolazione dell'apoptosi e la segnalazione cAMP.
• RAF1 si localizza nel citoplasma, nella membrana cellulare, nei mitocondri e nel nucleo. La sua traslocazione verso i mitocondri permette il legame con BCL2 e lo spostamento di BAD, fornendo un meccanismo anti-apoptotico aggiuntivo.
• Nel muscolo scheletrico, l'isoforma 1 di RAF1 è più abbondante dell'isoforma 2, suggerendo ruoli regolatori specifici per tessuto.
• RAF1 è un protooncogene implicato in diversi tipi di cancro; la sua attività disregolata promuove la trasformazione oncogena, in parte attraverso la repressione delle proteine delle giunzioni strette come l'occludina tramite l'upregolazione di SNAI2/SLUG.
• La proteina contiene un dominio a dita di zinco ed è soggetta a molteplici modifiche post-traduzionali, inclusa la fosforilazione, che regolano strettamente la sua attività chinasi e la distribuzione subcellulare.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Questo anticorpo è stato prodotto contro un peptide sintetico fosforilato corrispondente alla Ser621 della RAF1 umana. È previsto che riconosca specificamente la RAF1 fosforilata in questo residuo. Per la rilevazione della RAF1 totale, può essere necessario un pan-anticorpo come controllo.
• Per Western blot, utilizzare protocolli standard ma assicurarsi di includere inibitori di fosfatasi nei buffer di lisi e di incubazione per preservare la fosforilazione. È prevista la rilevazione di una banda vicino a 73 kDa in campioni umani appropriati.
• Per l'immunoprecipitazione, ottimizzare la concentrazione dell'anticorpo e il tempo di incubazione per il proprio sistema sperimentale. Si raccomanda la pre-purificazione (pre-clearing) e controlli di isotipo appropriati.
• Per ELISA, questo anticorpo può essere utilizzato per la cattura o la rilevazione; convalidare l'affinità di legame e la specificità con controlli di peptide fosforilato e non fosforilato.
• Convalidare sempre l'anticorpo nella vostra specifica matrice di campione e nelle vostre condizioni sperimentali; le prestazioni possono variare in base al tipo di cellulare e allo stato di stimolazione.

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