Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-Fosfo-RB1 (S780) per WB, ELISA - P06400

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di RB1

• La proteina associata al retinoblastoma (RB1) è un tumore suppressore chiave e un regolatore del ciclo cellulare, che controlla la transizione G1/S e la progressione G0-G1. La sua attività è regolata dallo stato di fosforilazione.
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• RB1 ipofosforilato lega e inibisce i fattori di trascrizione E2F, bloccando la trascrizione dei geni necessari per l'ingresso nella fase S. Maschera fisicamente il dominio di transattivazione di E2F e recluta repressori che modificano la cromatina.
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• RB1 contribuisce direttamente alla formazione e al mantenimento dell'eterocromatina stabilizzando la metilazione degli istoni, in particolare reclutando SUV39H1 e KMT5B/C per metilare H4K20 e rafforzare l'eterocromatina costitutiva.
• La proteina mediano anche la repressione trascrizionale tramite SMARCA4/BRG1, legando i complessi di deacetilazione degli istoni (HDAC) a promotori come c-FOS. Nei neuroni, questa repressione è alleviata dalla defosforilazione di RB1 dipendente dal calcio.
• Oncoproteine virali (antigene grande T di SV40, HPV E7, adenovirus E1A) prendono di mira RB1, dissociando il complesso RB1-E2F per indurre l'ingresso della cellula ospite nella fase S.
• Subcellolarmente, RB1 è prevalentemente nucleare, dove esercita le sue funzioni di regolazione trascrizionale, ma può anche localizzarsi nel citoplasma.
• Espresso nella retina e nei cheratinociti del prepuzio, con espressione aggiuntiva in molti tipi di tessuto.
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• Le modifiche post-traduzionali includono estesa fosforilazione (ad esempio, alla S780 da parte delle chinasi dipendenti da ciclina), acetilazione e metilazione, che modulano collettivamente la sua attività, le interazioni proteiche e la stabilità. Le parole chiave includono regolatore della cromatina, tumore suppressore e interazione ospite-virus.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Questo anticorpo monoclonale di coniglio fosfo-specifico prende di mira il sito di fosforilazione S780 su RB1; assicurati lo stato di fosforilazione del campione trattando le cellule con stimoli appropriati (ad esempio, stimolazione con siero, inibitori di CDK4/6) e includi sempre inibitori della fosfatasi durante la lisi per preservare l'epitopo.
• Per Western blot, la banda attesa è ~106 kDa. Valida la specificità utilizzando un controllo di blocco con peptide non fosforilato e confronta i segnali nei lisati trattati con fosfatasi rispetto a quelli non trattati.
• In ELISA, considera l'utilizzo di peptidi sintetici fosforilati e non fosforilati come antigeni di rivestimento per confermare la selettività per lo stato di fosforilazione.
• La reattività crociata è riportata per uomo e ratto; se utilizzi campioni di topo, verifica l'omologia della sequenza intorno alla S780 e esegui un esperimento pilota.
• Ottimizza empiricamente la diluizione dell'anticorpo, poiché non è fornita una concentrazione di lavoro validata, e includi sempre controlli positivi (ad esempio, linee cellulari tumorali proliferanti) e negativi (ad esempio, RB1-nulli o privi di siero).

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