Anticorpo policlonale di coniglio Anti-Fosfo-RET (Tyr905) per WB & ELISA - P07949

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di RET

• RET (recettore tirosin-chinasi proto-oncogenico Ret) è un membro della superfamiglia delle cadherine e funziona come recettore tirosin-chinasi che richiede sia il ligando che un co-recettore per l'attivazione.
  Riferimenti correlati: PMID:21994944, PMID:23333276, PMID:28846097
• Svolge ruoli essenziali nella proliferazione cellulare, navigazione neuronale, migrazione cellulare e differenziazione, in particolare durante lo sviluppo del sistema enterico e del rene.
  Riferimenti correlati: PMID:20064382, PMID:20616503, PMID:20702524, PMID:21994944
• La segnalazione di RET viene attivata dal legame dei ligandi della famiglia GDNF ai co-recettori GFRα, che induce la dimerizzazione del recettore, l'autofosforilazione e l'attivazione delle vie di segnalazione a valle MAPK e AKT.
  Riferimenti correlati: PMID:21994944, PMID:23333276, PMID:24560924, PMID:28846097
• RET funziona anche come recettore di dipendenza: promuove la sopravvivenza cellulare in presenza del ligando e induce l'apoptosi in sua assenza; questo meccanismo è fondamentale nei somatotrofi pituitari e nei neuroni simpatici.
  Riferimenti correlati: PMID:20616503, PMID:21357690
• Subcellularmente, RET è localizzato sulla membrana plasmatica e sulla membrana degli endosomi, dove la segnalazione può essere sostenuta o modulata.
• Come fosfoproteina, l'attività chinasi di RET dipende dall'autofosforilazione di residui di tirosina chiave, tra cui Tyr905 nel dominio chinasi, essenziale per l'attivazione catalitica e la trasduzione del segnale.
• Mutazioni oncogeniche e di perdita di funzione in RET sono collegate alle neoplasie endocrine multiple di tipo 2A/2B (MEN2A, MEN2B) e alla malattia di Hirschsprung (HSCR1), a conferma della sua rilevanza clinica nei disordini neuroendocrini e dello sviluppo.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Aggiungere inibitori di fosfatasi nei tamponi di lisazione e ridurre al minimo i cicli di congelamento-scongelamento per preservare il segnale di fosforilazione.
• Utilizzare linee cellulari stimulate con GDNF (ad esempio cellule di neuroblastoma o carcinoma tiroideo che esprimono RET) come controllo positivo per la rilevazione su western blot.
• Per verificare la fosfo-specificità, pre-incubare l'anticorpo con l'immunogeno peptidico fosforilato; il segnale deve essere bloccato dal peptide fosforilato, ma non dal corrispondente peptide non fosforilato.
• A causa delle grandi dimensioni della proteina (124 kDa), si consiglia di utilizzare un gel SDS-PAGE a gradiente o a bassa percentuale di acrilammide e tempi di trasferimento prolungati per ottenere una risoluzione e un'efficienza di trasferimento ottimali.

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