Anticorpo policlonale coniglio anti-Fosfo-RIPK1 (S166) per WB e ELISA - Q13546

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della RIPK1

• RIPK1 è una chinasi serina-treonina che agisce come regolatore chiave dell'apoptosi mediata da TNF, della necroptosi e delle vie infiammatorie [PMID:17703191, PMID:24144979, PMID:31827280]. Riferimenti correlati: PMID:17703191 PMID:24144979 PMID:31827280
• L'attività chinasica della RIPK1 è essenziale per regolare la morte cellulare, inclusa l'assemblaggio di complessi apoptotici e necroptotici [PMID:11101870, PMID:19524512, PMID:19524513]. Riferimenti correlati: PMID:11101870 PMID:19524512 PMID:19524513
• RIPK1 possiede anche funzioni di scaffold indipendenti dalla chinasi, promuovendo la sopravvivenza cellulare attivando NF-kappa-B quando viene reclutata nel complesso di segnalazione TNF-R1.
• Durante lo sviluppo embrionale, RIPK1 è necessaria per inibire l'apoptosi e la necroptosi, prevenendo la morte cellulare aberrante.
• La proteina si localizza sia nel citoplasma che nella membrana cellulare.
• RIPK1 subisce multiple modificazioni post-traduzionali, inclusa la fosforilazione, l'ubiquitinazione e il clivaggio proteolitico, che determinano le sue funzioni pro-sopravvivenza o pro-morte.
• RIPK1 è coinvolta nella risposta infiammatoria, promuovendo la produzione di citochine pro-infiammatorie come IL-6 [PMID:31827280, PMID:31827281]. Riferimenti correlati: PMID:31827280 PMID:31827281

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico attorno a Ser166 della RIPK1 umana; ci si aspetta che l'anticorpo riconosca specificamente la RIPK1 fosforilata in questo sito.
• Per il Western blot, indurre la fosforilazione della RIPK1 utilizzando TNF o altri stimoli nel sistema sperimentale prima della lisi. Considerare l'uso di inibitori delle fosfatasi nel tampone di lisi.
• Validare la specificità confrontando i segnali di campioni trattati con fosfatasi o per competizione peptidica con il peptide di controllo non fosforilato.
• Per l'ELISA, il fosfo-peptide può essere utilizzato come antigene di rivestimento; confermare la riduzione del segnale dopo defosforilazione.
• È indicata la reattività crociata con il mouse; verificare il rilevamento in tessuti o cellule murine e ottimizzare la diluizione dell'anticorpo per ogni specie.

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