Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-Fosfo-RPA2-Ser33 per WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P15927

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della subunità 32 kDa della proteina di replicazione A

• RPA2 è la subunità da 32 kDa del complesso eterotrimerico della proteina di replicazione A (RPA), che include anche RPA1 (70 kDa) e RPA3 (14 kDa). È anche conosciuto come fattore di replicazione A proteina 2 (RF-A proteina 2) e RP-A p34.
• Il complesso RPA lega e stabilizza il DNA a singolo filamento (ssDNA) durante la replicazione del DNA e dopo un danno al DNA, prevenendo la riannellamento e reclutando proteine chiave per il metabolismo del DNA.
• Nella risposta al danno del DNA, RPA2 facilita il reclutamento di ATRIP, che attiva la chinasi ATR, un regolatore principale della segnalazione dei punti di controllo.
• RPA2 è essenziale per il reclutamento di fattori di riparazione del DNA come RAD51, RAD52, XPA e XPG sulla cromatina nei siti di danno, permettendo la ricombinazione omologa e la riparazione per escissione nucleotidica.
• Il complesso svolge anche un ruolo nella riparazione per escissione delle basi (BER), probabilmente attraverso l'interazione con UNG, e stimola l'attività elicasi 5'-3' di BRIP1/FANCJ per promuovere il riavvio della forcella di replicazione. Riferimenti correlati: PMID:17596542
• RPA2 localizza prevalentemente nel nucleo e può essere trovato nei corpi nucleari PML.
• Le modifiche post-traduzionali, tra cui la fosforilazione alla Ser33, l'acetilazione e l'ubiquitinazione, regolano le funzioni di RPA2 nella riparazione e nella replicazione del DNA.
• Lo splicing alternativo di RPA2 produce più isoforme, contribuendo alla diversità funzionale.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Per Western blot (WB), convalidare la fosfo-specificità confrontando i segnali tra campioni trattati e non trattati o utilizzando un trattamento con lambda fosfatasi.
• In immunofluorescenza (IF-P) e immunoistochimica (IHC-P), ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione per preservare l'epitopo fosforilato, poiché una fissazione eccessiva può mascherare il bersaglio.
• Quando si utilizza l'ELISA, considerare di abbinare questo anticorpo fosfo-specifico a un anticorpo RPA2 totale per normalizzare il caricamento proteico e valutare la stechiometria della fosforilazione.
• Sebbene sia reattivo in modo crociato con RPA2 di topo e ratto, confermare l'omologia di sequenza intorno alla Ser33 in queste specie per garantire un riconoscimento costante.

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