Anticorpo policlonale coniglio Anti-Fosfo-S6 Ribosomal Protein (RPS6)-S240/244 per WB, IHC-P, IP, ELISA - P62753

Specifiche principali del prodotto e parametri

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di RPS6

• RPS6 codifica per la proteina ribosomiale S6 40S (nota anche come fosfoproteina NP33), un componente fondamentale della subunità ribosomiale piccola (40S).
• Essenziale per il controllo della crescita e della proliferazione cellulare attraverso la traduzione selettiva di classi di mRNA, in particolare quelle contenenti motivi oligopirimidinici terminali 5' (TOP). Riferimenti correlati: PMID:17220279
• Durante la biogenesi del ribosoma, RPS6 fa parte del processoma della subunità piccola (SSU) nel nucleolo, contribuendo al ripiegamento, alla modifica e al processamento del pre-rRNA. Riferimenti correlati: PMID:34516797
• La localizzazione subcellulare spazia dal citoplasma al nucleo e al nucleolo, riflettendo i suoi doppi ruoli nella traduzione dell'mRNA e nell'assemblaggio del ribosoma.
• Soggetta a estese modifiche post-traduzionali, inclusa la fosforilazione su più residui (es. Ser240/244), acetilazione, ADP-ribosilazione e idrossilazione; la fosforilazione è fondamentale per la regolazione della traduzione.
• Classificata come fosfoproteina, ribonucleoproteina e parte del proteoma di riferimento; ampiamente studiata come effettore a valle della segnalazione mTOR.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Poiché l'immunogeno è un fosfo-peptide sintetico corrispondente alla Ser240 e Ser244 fosforilate, ci si aspetta che l'anticorpo rilevi specificamente RPS6 solo quando è doppiamente fosforilato. Convalidare la specificità confrontando i segnali di cellule trattate vs non trattate o utilizzando un trattamento con fosfatasi.
• Per il Western blotting, utilizzare tamponi di lisi che preservano la fosforilazione integrati con inibitori delle fosfatasi. Ottimizzare la diluizione dell'anticorpo (es. 1:500–1:2000) in una linea cellulare pertinente stimolata con siero o fattori di crescita per indurre la fosforilazione di RPS6.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), le condizioni di recupero dell'antigene possono influenzare l'accessibilità dell'epitopo. Includere sempre controlli positivi (tessuto stimolato) e negativi (peptide di blocco non fosforilato).
• Per l'immunoprecipitazione (IP), considerare il cross-linking dell'anticorpo alle perle per evitare interferenze dalle catene pesanti/leggere a ~29 kDa. L'ELISA può essere utilizzato per la quantificazione della fosfo-RPS6 nei lisati cellulari, ma confermare la linearità e la specificità.

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