Anticorpo monoclonale di coniglio Anti-Fosfo-Smad3 (S423/S425) per WB, IHC-P, ELISA - P84022

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della Fosfo-Smad3 (S423/S425)

• SMAD3 (Mothers against decapentaplegic homolog 3) è una proteina SMAD regolata dal recettore (R-SMAD) che agisce come trasduttore di segnale intracellulare per le vie TGF-beta e activina.
• Dopo la fosforilazione in S423 e S425 da parte delle chinasi del recettore di tipo 1, SMAD3 forma un complesso con SMAD4 e si trasloca nel nucleo per legare l'elemento TRE, attivando la trascrizione dei geni bersaglio.
• SMAD3 può anche formare un complesso con SMAD4, JUN e FOS nei siti AP-1/SMAD, integrando la segnalazione TGF-beta con altre vie.
• Svolge un ruolo regolatorio nella guarigione delle ferite, dove inibisce la crescita e la migrazione dei cheratinociti, altera la chemiotassi dei monociti e presenta effetti ormono-sensibili.
• SMAD3 regola positivamente l'attività chinasi di PDPK1 promuovendone la dissociazione dalla proteina inibitoria 14-3-3 YWHAQ.
• La proteina è localizzata sia nel citoplasma che nel nucleo, e si sposta tra i due compartimenti in risposta alla segnalazione.
• Le modificazioni post-traduzionali comprendono fosforilazione, acetilazione, ADP-ribosilazione e ubiquitinazione; la fosforilazione nel motivo C-terminale SSXS è critica per l'attivazione.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Per Western blotting, utilizzare tamponi di lisio specifici per proteine fosforilate e aggiungere inibitori delle fosfatasi per mantenere la fosforilazione in S423/S425.
• Verificare la specificità della banda trattando i lisati cellulari con lambda fosfatasi o mediante competizione con un peptide non fosforilato.
• Durante l'esecuzione di IHC-P, ottimizzare le condizioni di recupero dell'antigene e considerare metodi di recupero specifici per epitopi fosforilati.
• Per ELISA, abbinare l'anticorpo a un anticorpo SMAD3 totale per quantificare il rapporto tra proteina fosforilata e proteina totale.

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