Anticorpo policlonale coniglio anti-Fosfo-Smad3-T179 per WB, IHC-P, ELISA - P84022

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di SMAD3

• SMAD3 (membro 3 della famiglia SMAD) è un SMAD regolato dal recettore (R-SMAD) e un trasduttore di segnale intracellulare, noto anche come JV15-2, omologo Mad 3 (Mad3) e hMAD-3. Media le risposte trascrizionali a valle delle chinasi dei recettori del TGF-beta e dell'attivina.
• Dopo fosforilazione e attivazione da parte delle chinasi del recettore di tipo 1, SMAD3 si lega all'elemento TRE nelle regioni promotoriche dei geni responsivi al TGF-beta e, in complesso con SMAD4, attiva la trascrizione.
• Inoltre, SMAD3 può formare un complesso SMAD3/SMAD4/JUN/FOS sui siti AP-1/SMAD per regolare la trascrizione, integrando i segnali del TGF-beta con altre vie di segnalazione.
• SMAD3 svolge un ruolo inibitorio nella guarigione delle ferite modulando la crescita e la migrazione dei keratinociti e la chemiotassi dei monociti mediata dal TGF-beta, e questo effetto è sensibile agli ormoni.
• Agisce come regolatore della condrogenesi e dell'osteogenesi e inibisce la guarigione iniziale delle fratture ossee.
• SMAD3 regola positivamente l'attività della chinasi PDPK1 promuovendo la sua dissociazione dalla proteina inibitoria 14-3-3 YWHAQ.
• Subcellularmente, SMAD3 si localizza sia nel citoplasma che nel nucleo, effettuando il traffico in risposta ai segnali di attivazione.
• La proteina subisce molteplici modifiche post-traduzionali tra cui la fosforilazione (ad esempio, in Thr179), l'acetilazione, l'ADP-ribosilazione e l'ubiquitinazione, che modulano la sua attività e stabilità. Contiene inoltre motivi di legame dello zinco ed è soggetta a splicing alternativo.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• Per il Western blotting (WB), utilizzare condizioni specifiche per proteine fosforilate con miscele di inibitori delle fosfatasi e convalidare la specificità utilizzando un controllo peptide non fosforilato o il trattamento dei campioni con fosfatasi.
• Nell'immunoistochimica (IHC-P), può essere necessario il recupero dell'antigene; la colorazione fosfo-specifica deve essere confermata confrontandola con la colorazione di SMAD3 totale su sezioni adiacenti.
• Per le applicazioni ELISA, includere una curva standard di peptide fosforilato e un controllo incrociato con peptide non fosforilato per garantire la fosfo-specificità.
• L'anticorpo presenta reazione crociata con SMAD3 di topo e ratto, ma si consiglia di convalidare l'omologia della sequenza bersaglio ed eseguire esperimenti pilota nel sistema di campionamento specifico.

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