Anticorpo Policlonale Anti-Fosfo-Smad5 (S463/S465) per WB, IHC-P, ELISA - Q99717

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di Smad5

• SMAD5 è un membro della famiglia SMAD di trasmettitori di segnale intracellulari e modulatori trascrizionali, noto anche come JV5-1, Mothers against decapentaplegic homolog 5, o MADH5.
• Dopo il legame del ligando BMP, SMAD5 viene fosforilato su serina C-terminali conservate (inclusi S463 e S465) dai recettori BMP di tipo I attivati, quindi si associa a SMAD4 per formare un complesso eteromerico che si trasloca nel nucleo per regolare l'espressione genica target. Riferimenti correlati: PMID:9442019, PMID:33510867
• Come fattore di trascrizione, SMAD5 fosforilato riconosce gli elementi di legame Smad (SBEs) nei promotori genici per modulare processi cellulari diversi come lo sviluppo embrionale, la differenziazione cellulare, l'angiogenesi e l'omeostasi tissutale. Riferimenti correlati: PMID:12064918, PMID:16516194
• Nel suo stato non fosforilato, SMAD5 opera nel citoplasma influenzando il metabolismo energetico interagendo con l'esochinasi 1 (HK1) per accelerare la glicolisi e promuovendo la respirazione mitocondriale in risposta a cambiamenti del pH citoplasmatico. Riferimenti correlati: PMID:28675158
• SMAD5 si localizza prevalentemente nel citoplasma e nel nucleo, ma anche nel mitocondrio, riflettendo i suoi ruoli multifunzionali.
• La proteina è espressa in modo ubiquitario nei tessuti ed è soggetta a modificazioni post-traduzionali tra cui fosforilazione e acetilazione; lega il DNA e ioni zinco.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico intorno a S463 e S465, suggerendo che l'anticorpo riconosca specificamente Smad5 fosforilato in questi siti target del recettore BMP. Considerare l'uso di inibitori della fosfatasi durante la preparazione del campione per preservare la fosforilazione.
• Per il Western blot (WB), il peso molecolare previsto è 52 kDa; convalidare il rilevamento in lisati cellulari rilevanti stimolati con BMP (ad es. campioni umani, di topo, di ratto).
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), ottimizzare il recupero dell'antigene e convalidare in sezioni tissutali dove la segnalazione BMP è attiva; considerare l'uso di controlli isotipici per confermare la specificità.
• Questo anticorpo potrebbe reagire in modo crociato con Smad5 non fosforilato o altri membri della famiglia Smad; verificare la specificità confrontando i segnali in campioni stimolati vs. non stimolati o utilizzando inibitori specifici.
• In ELISA, utilizzare la competizione con fosfo-peptide per confermare la specificità per la fosforilazione e calibrare utilizzando standard noti.

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