Anticorpo policlonale di coniglio Anti-Fosfo-SMO (S611/S615) per WB, ELISA - Q99835

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di SMO

• SMO (smoothened) è un recettore accoppiato a proteine G e un trasduttore chiave della via di segnalazione di Hedgehog, essenziale per lo sviluppo embrionale e l'omeostasi tissutale nell'adulto.
• In assenza di ligandi di Hedgehog, SMO è inibito dal recettore patched (PTCH1/PTCH2), che limita l'accesso del colesterolo a SMO; il legame di Hedgehog a patched annulla questa inibizione, consentendo la traslocazione di SMO verso il ciglio primario e la sua attivazione da parte del colesterolo. Riferimenti correlati: PMID:27437577 PMID:28344083 PMID:32929279
• Dopo l'attivazione, SMO si accoppia alla proteina G G(i), inibendo l'adenilato ciclasi e riducendo i livelli di cAMP; questo dereprime la proteina chinasi A (PKA), portando alla stabilizzazione e attivazione dei fattori di trascrizione GLI. Riferimenti correlati: PMID:28344083 PMID:31168089
• SMO attivo può anche inibire direttamente la PKA sequestrando la sua subunità catalitica PRKACA sulla membrana cellulare, prevenendo la fosforilazione e il processamento dei fattori di trascrizione GLI. Riferimenti correlati: PMID:36202993 PMID:39138140
• SMO si localizza principalmente sulla membrana cellulare e sulla membrana del ciglio primario, un compartimento chiave per la segnalazione di Hedgehog.
• L'anticorpo riconosce specificamente la fosforilazione sui residui di serina 611 e 615, modifiche post-traduzionali che influenzano probabilmente la conformazione, l'attività o il traffico di SMO.
• Le mutazioni in SMO sono implicate in diverse malattie dello sviluppo e tumori, a conferma del suo ruolo regolatorio critico.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico corrispondente alla regione Ser611/Ser615 di SMO umano; per Western blot è attesa una banda intorno a 86 kDa. Per confermare la fosfo-specificità, si consiglia di trattare i campioni con lambda fosfatasi o di utilizzare un competitore non fosfopeptidico.
• Poiché gli stati di fosforilazione di SMO possono essere dinamici, è consigliabile utilizzare miscele di inibitori di fosfatasi durante la lisi; includere anche controlli positivi e negativi appropriati (ad esempio, cellule stimolate con Hedgehog vs cellule non stimolate).
• La rilevazione con Western blot può richiedere l'ottimizzazione del blocco e della diluizione dell'anticorpo; testare un intervallo di concentrazioni e convalidare in linee cellulari o tessuti umani con segnalazione di Hedgehog attiva (ad esempio, fibroblasti trattati con SHH).
• Per ELISA, l'anticorpo può essere adatto a rilevare peptidi di SMO fosforilati o lisati cellulari; confermare il legame con un peptide fosfo-specifico e un controllo non fosfo per valutare la specificità.

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