Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Fosfo-SQSTM1/p62-S349 per WB, ELISA - Q13501

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di SQSTM1/p62

• SQSTM1, noto anche come p62, funge da adattatore molecolare per la macroautofagia selettiva (aggrefagia), collegando aggregati proteici poliubiquitinati e autofagosomi attraverso i suoi domini UBA e LIR. Riferimenti correlati: PMID:15340068 PMID:15953362 PMID:16286508
• Legandosi alle proteine ubiquitinate tramite il dominio UBA, SQSTM1 subisce una separazione di fase liquido-liquido per formare corpi p62, che vengono poi destinati alla degradazione autofagica. Riferimenti correlati: PMID:15911346 PMID:20168092 PMID:22017874
• SQSTM1 funge anche da hub di segnalazione, attivando la risposta antiossidante NFE2L2/NRF2 sequestrando KEAP1 in corpi di inclusione, promuovendo così l'accumulo nucleare di NRF2 e l'espressione di geni citoprotettivi. Riferimenti correlati: PMID:20452972 PMID:28380357 PMID:33393215
• A livello subcellulare, SQSTM1 si localizza in più compartimenti, inclusi autofagosomi, vescicole citoplasmatiche, corpi PML nel nucleo, endosomi tardivi, lisosomi e il sarcomero nelle cellule muscolari.
• La proteina è una nota fosfoproteina, con la fosforilazione in vari residui (incluso Ser349) che influisce sulla sua oligomerizzazione, riconoscimento del carico e regolazione dell'autofagia.
• Ampiamente espresso nei tessuti, SQSTM1 è implicato in malattie neurodegenerative, cancro e segnalazione immunitaria.
• Contiene diversi domini funzionali: PB1 (polimerizzazione), dito di zinco di tipo ZZ, TB (legame TRAF6), LIR (regione interagente con LC3) e UBA (associato all'ubiquitina), che consentono diverse interazioni proteina-proteina.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico fosforilato attorno a Ser349, suggerendo che l'anticorpo riconosca specificamente SQSTM1 fosforilato in questo sito. Confermare la specificità mediante trattamento con fosfatasi o confrontando i segnali in cellule stimolate vs. non stimolate, ove appropriato.
• Per l'analisi Western blot, utilizzare un gel SDS-PAGE riducente e includere inibitori delle fosfatasi freschi nel tampone di lisi per preservare la fosforilazione. Può essere osservata una banda intorno a 48–62 kDa a seconda del campione; SQSTM1 spesso migra a un peso molecolare apparente più alto a causa di modifiche post-traduzionali.
• Per le applicazioni ELISA, i saggi ELISA spesso richiedono l'ottimizzazione del pH di rivestimento e delle diluizioni dell'anticorpo. Validare l'intervallo lineare dell'anticorpo con peptidi competitori noti fosforilati e non fosforilati.
• È riportata reattività incrociata con topo e ratto, rendendolo adatto per studi su modelli roditori; verificare sempre nel proprio sistema sperimentale specifico.

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