Anticorpo Monoclonale Coniglio Anti-Fosfo-STAT1 (S727) per WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - P42224

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di STAT1

• STAT1 (Signal transducer and activator of transcription 1) esiste come due isoforme generate da splicing alternativo, STAT1-alfa (p91) e STAT1-beta (p84), che differiscono nel loro dominio C-terminale di transattivazione.
• Come mediatore chiave della segnalazione dell'interferone (IFN), STAT1 viene fosforilato su tirosina in risposta agli IFN di tipo I, eterodimerizza con STAT2 e IRF9 per formare il complesso ISGF3 e induce l'espressione genica antivirale tramite elementi ISRE. Riferimenti correlati: PMID:28753426, PMID:35568036
• Sotto stimolazione di IFN di tipo II (IFN-gamma), STAT1 viene fosforilato sia sui residui tirosina che serina, omodimerizza in GAF e si lega alle sequenze GAS per attivare i geni bersaglio. Riferimenti correlati: PMID:8156998, PMID:26479788
• La segnalazione STAT1 è innescata anche da KITLG/SCF e può partecipare alle vie mediate da FGFR. Riferimenti correlati: PMID:15526160, PMID:19088846
• Nell'immunità innata, l'endocitosi di TLR4 dopo stimolazione con LPS porta alla fosforilazione dipendente da IKBKB di STAT1 a Thr-749, guidando la trascrizione di ARID5A e IL12B. Riferimenti correlati: PMID:32209697
• STAT1 è principalmente citoplasmatico ma subisce translocazione nucleare dopo l'attivazione; il suo shuttling subcellulare è regolato dalla fosforilazione e altre modifiche post-traduzionali, inclusi acetilazione, metilazione e ubiquitinilazione.
• La fosforilazione della serina 727 nel dominio di transattivazione è essenziale per la massima attività trascrizionale, e l'anticorpo riconosce specificamente questa modifica, consentendo di analizzare la dinamica di attivazione di STAT1.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico attorno alla Ser727 di STAT1 umano; assicurarsi che la preparazione del campione includa inibitori delle fosfatasi per preservare l'epitopo fosfo.
• Per il Western blot, prevedere una banda vicino a 87 kDa; un controllo con anticorpo STAT1 non fosforilato può aiutare a conferire la specificità fosfo.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), ottimizzare fissaggio e permeabilizzazione per bilanciare l'accessibilità dell'antigene e la ritenzione dell'epitopo fosfo; la fissazione con metanolo può essere benefica.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), testare attentamente le condizioni di recupero dell'antigene; considerare l'uso di controlli fosfo-specifici come il trattamento con fosfatasi lambda.
• Quando si utilizza l'ELISA, un esperimento di bloccaggio con fosfopeptide può validare la specificità del segnale.
• La reattività crociata con STAT1 di topo e ratto è indicata; tuttavia, verificare le prestazioni nel vostro specifico modello sperimentale a causa di possibili differenze specie-dipendenti nella sequenza o nella dinamica di fosforilazione.

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