Anticorpo policlonale di coniglio anti-Ubiquitina fosforilata-Ser65 per WB, ELISA - P62979 / P62987 / P0CG47 / P0CG48

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione dell'ubiquitina

• L'ubiquitina è una proteina di 76 aminoacidi altamente conservata, espressa da quattro geni (RPS27A, UBA52, UBB, UBC), che origina proteine di fusione (ad esempio, ubiquitina-proteina ribosomiale eS31 e eL40) e precursori di poliubiquitina.
• Agisce come modificatore post-traduzionale mediante coniugazione covalente ai residui di lisina delle proteine bersaglio, formando catene monomeriche o poliubiquitiniche. Diversi tipi di legame (Lis-6, -11, -29, -33, -48, -63 e lineare) determinano risultati cellulari diversi, tra cui la degradazione proteasomale (Lis-48), la riparazione del DNA (Lis-6/63), l'endocitosi e la segnalazione di NF-κB (Lis-63).
• Come fusione con la proteina ribosomiale eS31, l'ubiquitina è parte integrante della subunità ribosomiale 40S ed essenziale per l'assemblaggio del processoma della subunità piccola e la biogenesi dei ribosomi. Riferimenti correlati: PMID:23636399 PMID:9582194 PMID:34516797
• L'ubiquitina si localizza prevalentemente nel citoplasma e nel nucleo, incluso il nucleolo, in coerenza con i suoi ruoli nella degradazione proteica, nella segnalazione e nella biogenesi dei ribosomi.
• Le modifiche post-traduzionali, tra cui la fosforilazione alla Ser65, l'acetilazione e l'ADP-ribosilazione, regolano la struttura e la funzione dell'ubiquitina. La fosforilazione alla Ser65 modula specificamente l'assemblaggio delle catene di ubiquitina ed è implicata nella mitofagia e nella segnalazione immunitaria innata.

Indicazioni sperimentali e consigli tecnici

• Per Western blot, si consiglia di aggiungere inibitori di fosfatasi nei buffer di lisi per preservare la fosforilazione alla Ser65.
• Convalidare la fosfo-specificità trattando i campioni con lambda fosfatasi; il segnale dovrebbe scomparire dopo la defosforilazione.
• Includere controlli positivi e negativi appropriati (ad esempio, cellule stimolate vs non stimolate) per confermare la specificità dell'anticorpo.
• Per ELISA, ottimizzare la concentrazione dell'antigene di coating e la diluizione dell'anticorpo per ottenere un rapporto segnale/rumore ottimale.
• Si noti che l'anticorpo può riconoscere l'ubiquitina di tutti e quattro i geni grazie alla conservazione della sequenza intorno alla Ser65; se necessario, si consiglia di utilizzare il knockdown gene-specifico.

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