Anticorpo policlonale Anti-Fosfo-VASP-S239 per WB, IHC-P, ELISA - P50552

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione della VASP

• VASP (proteina fosforilata stimolata dai vasodilatatori) è una proteina associata all'actina appartenente alla famiglia Ena/VASP, che svolge ruoli critici nella dinamica del citoscheletro di actina e nella polarità cellulare.
• VASP promuove l'allungamento dei filamenti di actina proteggendo le estremità a barba dalle proteine di capping e aumentando i tassi di polimerizzazione, regolando così la dinamica dei lamellipodi e dei filopodi, l'attivazione delle piastrine e la migrazione cellulare.
• Nelle piastrine, dove è altamente espresso, VASP regola la dinamica dell'actina e svolge un ruolo importante nell'aggregazione piastrinica.
• VASP si localizza nelle adesion focali, nelle giunzioni strette e nella membrana dei lamellipodi e dei filopodi, funzionando nei siti di rimodellamento dinamico dell'actina.
• VASP è una fosfoproteina; la fosforilazione nei siti di regolazione modula le sue funzioni nell'assemblaggio dell'actina, con S239 che è un bersaglio chiave per la segnalazione delle chinasi.
• La proteina contiene domini a elica a spira e di leg-binding SH3 che mediano le interazioni proteina-proteina essenziali per l'organizzazione del citoscheletro e la motilità cellulare.
• VASP contribuisce anche alla motilità basata sull'actina di patogeni come Listeria monocytogenes nelle cellule ospiti.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Dato che l'immunogeno è un peptide fosforilato sintetico, includere inibitori delle fosfatasi durante la preparazione del campione per preservare i marchi di fosforilazione per un rilevamento accurato.
• Validare la fosfo-specificità nel Western blot trattando i campioni con lambda fosfatasi; la perdita del segnale conferma la dipendenza dalla fosforilazione S239.
• Per IHC-P, ottimizzare delicatamente le condizioni di recupero dell'antigene, poiché un calore eccessivo potrebbe interrompere il gruppo fosfato; considerare l'uso di un metodo di recupero a bassa temperatura.
• Verificare l'omologia di sequenza della regione peptidica nel mouse e nel ratto per confermare la reattività crociata prevista; lievi disomologie potrebbero influenzare l'affinità di legame.
• Eseguire sempre controlli non fosforilati e fosforilati in parallelo per distinguere la proteina totale dai segnali fosforilati.

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