Anticorpo policlonale di coniglio Anti-Fosfo-ZAP70-Y319 per WB, IP, ELISA - P43403

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di ZAP70

• ZAP-70 (proteina associata alla catena zeta da 70 kDa) è una tirosina chinasi citoplasmatica codificata dal gene ZAP70 (SRK) e appartiene alla famiglia Syk delle tirosin chinasi non recettoriali.
• Essenziale per l'immunità adattativa, ZAP-70 viene reclutata nel complesso fosforilato del recettore delle cellule T (TCR) sulla membrana plasmatica tramite i suoi domini SH2, avviando la segnalazione a valle. Riferimenti correlati: PMID:7509083
• Dopo l'aggancio al TCR, ZAP-70 fosforila gli adattatori chiave LAT e LCP2, innescando cascate che portano all'attivazione, alla proliferazione e alla produzione di citochine delle cellule T.
• Regola lo sviluppo dei timociti, promuovendo la sopravvivenza e la progressione del ciclo cellulare dei timociti doppiamente negativi prima della selezione positiva.
• È anche coinvolto nello sviluppo e nell'attivazione delle cellule B primarie tramite la segnalazione del recettore delle cellule B (BCR).
• Localizzato nel citoplasma e sulla membrana cellulare, ZAP-70 subisce la fosforilazione alla Y319 (tra le altre) per annullare l'autoinibizione e consentire la piena attività chinasi.
• Fosforilazione, acetilazione e ubiquitinazione sono modifiche post-traduzionali critiche che regolano la stabilità e la funzione di ZAP-70.
• Espresso principalmente in cellule T, cellule natural killer, timociti precoci e cellule pro/pre-B.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• Questo anticorpo è stato prodotto contro un fosfopeptide sintetico corrispondente alla Y319 di ZAP70 umano; se necessario, confermare la specificità tramite saggio di competizione peptidica.
• Per il Western blotting, utilizzare protocolli validati specifici per fosfoproteine e includere inibitori della fosfatasi nei buffer di lisci per preservare gli stati di fosforilazione.
• Negli esperimenti di immunoprecipitazione, si raccomandano condizioni di lisci leggere per mantenere le interazioni proteina-proteina e l'accessibilità dell'epitopo.
• Validare la prestazione in appropriate linee cellulari T umane (come Jurkat) attivate tramite anti-CD3/CD28 per indurre la fosforilazione di ZAP70.
• Per le applicazioni ELISA, titolare la concentrazione dell'anticorpo contro uno standard di fosfopeptide per garantire un intervallo di rilevazione lineare.

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