Anticorpo policlonale di coniglio anti-fosfo-Zap70-Y319+Syk-Y352 per WB, IF/ICC, ELISA - P43403/P43405

Specifiche e parametri principali del prodotto

Background biologico: Funzione e localizzazione di ZAP70

• ZAP70 (proteina associata alla catena zeta da 70 kDa) è una tirosina chinasi citoplasmatica appartenente alla famiglia Syk, nota anche come tirosina chinasi correlata a Syk (SRK).
• Essenziale per la segnalazione del recettore delle cellule T (TCR): dopo l'attivazione del TCR, ZAP70 viene reclutato sui motivi ITAM fosforilati sulle catene CD3, dove viene fosforilato e attivato da LCK, avviando cascate di segnalazione a valle. Riferimenti correlati: PMID:7509083
• ZAP70 attivato fosforila le proteine adattatrici LAT e LCP2, innescando una rete di segnalazione che regola l'attivazione, la proliferazione, la produzione di citochine e la differenziazione delle cellule T.
• Oltre alla segnalazione TCR, ZAP70 controlla l'adesione, la motilità e la riorganizzazione del citoscheletro delle cellule T; media anche l'internalizzazione e la degradazione del TCR tramite l'interazione con CBL, SLA e SLA2, modulando così i livelli di TCR di superficie.
• ZAP70 contribuisce anche allo sviluppo e all'attivazione delle cellule B attraverso la segnalazione del recettore delle cellule B (BCR).
• Durante lo sviluppo dei timociti, ZAP70 promuove la sopravvivenza e la progressione del ciclo cellulare dei timociti CD4/CD8 doppi negativi prima della selezione positiva.
• Localizzazione subcellulare: prevalentemente citoplasmatica, ma trasloca sulla membrana plasmatica in seguito alla stimolazione del TCR.
• Espressione tissutale: principalmente nelle cellule T e nelle cellule natural killer, con livelli inferiori nei timociti precoci e nelle cellule pro/pre B.
• Le caratteristiche chiave includono domini SH2 tandem N-terminali che si legano agli ITAM fosforilati, un dominio chinasico con un sito di legame per l'ATP e molteplici siti di fosforilazione (es. Y319) che regolano l'attività; annotato con parole chiave come fosfoproteina, splicing alternativo e variante di malattia.

Guida sperimentale e consigli tecnici

• L'immunogeno è un fosfopeptide sintetico attorno alla Y319 di ZAP70 umano; l'anticorpo riconosce anche la corrispondente fosfo-Y352 di Syk a causa della somiglianza di sequenza attorno al sito di fosforilazione.
• Per il western blotting, considerare l'utilizzo di lisati da linee cellulari T stimolate con anti-CD3 o pervanadato per indurre una robusta fosforilazione; includere un controllo di defosforilazione (es. trattamento con λ-fosfatasi) per confermare la fosfo-specificità.
• Nell'immunofluorescenza/ICC, ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione per preservare sia la fosfo-epitopo che l'architettura cellulare; eseguire una controcolorazione con un anticorpo ZAP70 totale per valutare lo stato di attivazione.
• Per l'ELISA, è possibile impiegare un antigene di rivestimento fosfo-peptidico; assicurarsi che le fasi di blocco riducano al minimo il legame aspecifico.
• La reattività crociata con il topo consente il rilevamento in modelli di cellule T murine; tuttavia, convalidare la reattività nello specifico sistema sperimentale.
• Il peso molecolare previsto di ZAP70 è ~70 kDa; per Syk, rilevare l'isoforma da ~72 kDa. Nel WB, questo può apparire come bande ravvicinate o come una singola banda a seconda della risoluzione.

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