Anticorpo Policlonale di Coniglio Anti-Fosfo-ZAP70 (Y493) per WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P43403

Specifiche e Parametri Principali del Prodotto

Contesto Biologico: Funzione e Localizzazione di ZAP70

• ZAP70 (proteina associata alla catena zeta di 70 kDa) è una tirosin chinasi citoplasmatica essenziale per la regolazione immunitaria adattativa, che media la segnalazione del recettore delle cellule T (TCR) in seguito alla presentazione dell'antigene (PubMed:7509083). Riferimenti correlati: PMID:7509083
• La proteina contiene domini SH2 tandem che legano motivi ITAM fosforilati sulle catene CD3, alleviando l'auto-inibizione e permettendo la fosforilazione mediata da LCK a Tyr493 per la piena attivazione.
• Dopo l'attivazione, ZAP70 fosforila gli adattatori chiave LAT e LCP2, innescando cascate a valle che regolano la proliferazione delle cellule T, la produzione di citochine e la riorganizzazione del citoscheletro.
• ZAP70 è coinvolta nello sviluppo dei timociti, promuovendo la sopravvivenza e la progressione del ciclo cellulare delle cellule doppio negative CD4/CD8 prima della selezione positiva.
• Contribuisce anche allo sviluppo e all'attivazione delle cellule B attraverso la segnalazione del recettore delle cellule B, evidenziando ruoli linfoidi più ampi.
• La localizzazione subcellulare è principalmente citoplasmatica, con reclutamento alla membrana plasmatica dopo l'ingaggio del TCR; partecipa anche all'internalizzazione del TCR tramite ubiquitinazione mediata da CBL.
• Esprime prevalentemente in cellule T, cellule natural killer, timociti precoci e cellule pro/pre B, con difetti genetici che causano immunodeficienza combinata grave (SCID) e condizioni autoimmuni.
• Le modifiche post-traduzionali includono fosforilazione della tirosina, acetilazione e ubiquitinazione, cruciali per la sua regolazione dinamica.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• Essendo un anticorpo fosfo-specifico diretto contro Tyr493, assicurarsi che i campioni siano trattati con inibitori delle fosfatasi durante la lisi e considerare il trattamento con fosfatasi come controllo negativo.
• Per il Western blot, il peso molecolare previsto è di circa 70 kDa; utilizzare una percentuale di gel appropriata (ad es. 8-10%) per una risoluzione ottimale.
• Convalidare la specificità dell'anticorpo nel proprio sistema modello utilizzando la competizione con peptide o approcci di knockdown/knockout genetico.
• Per l'immunoistochimica (IHC-P), potrebbe essere necessario il recupero dell'antigene; testare buffer di recupero a pH 6 o pH 9.
• Nell'immunofluorescenza (IF/ICC), monitorare la localizzazione di membrana dopo stimolazione; le condizioni di permeabilizzazione e fissaggio devono essere ottimizzate.
• ELISA e altre applicazioni potrebbero richiedere una titolazione per determinare la concentrazione di lavoro ottimale.

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