Anticorpo Policlonale Anti-PI4KA da Coniglio per WB, IF/ICC, ELISA - P42356

Specifiche e Parametri Fondamentali del Prodotto

Background Biologico: Funzione e Localizzazione della PI4KA

• PI4KA (Fosfatidilinositolo 4-chinasi alfa), nota anche come PIK4CA o PI4K-ALPHA, è una chinasi lipidica che catalizza la fosforilazione del fosfatidilinositolo in fosfatidilinositolo 4-fosfato, il primo passaggio determinante nella generazione del secondo messaggero inositolo-1,4,5-trisfosfato.
• Questo enzima svolge un ruolo centrale nelle vie di segnalazione dei fosfoinositidi, regolando il traffico di membrana, la proliferazione cellulare e l'omeostasi intracellulare del calcio.
• Esistono più isoforme dovute allo splicing alternativo; l'isoforma canonica è una proteina di grandi dimensioni con un peso molecolare di circa 237 kDa.
• PI4KA è localizzata principalmente nel citoplasma e nella membrana cellulare, dove si associa alla membrana plasmatica per esercitare la sua attività chinasica.
• L'espressione tissutale è ubiquitaria, con i livelli più alti nella placenta e nel cervello; l'espressione è bassa o assente nel polmone, nel fegato, nel pancreas, nel testicolo e nei leucociti.
• La proteina contiene un dominio di legame per l'ATP e un dominio di chinasi lipidica, e la sua attività è regolata dalla fosforilazione.
• Le mutazioni nel gene PI4KA sono associate alla paraplegia spastica ereditaria (SPG84) e ad altre patologie neurologiche, a conferma della sua importanza per la funzione neuronale.
• Le parole chiave da UniProt includono: splicing alternativo, legame ATP, variante patologica, paraplegia spastica ereditaria, chinasi, metabolismo lipidico, membrana, neurodegenerazione e fosfoproteina.

Guida Sperimentale e Consigli Tecnici

• L'immunogeno corrisponde alla regione C-terminale (aa 1780-1860); l'anticorpo può riconoscere epitopi in questo segmento, garantendo la rilevazione della PI4KA full-length.
• A causa delle grandi dimensioni della proteina (237 kDa), utilizzare un gel SDS-PAGE a bassa percentuale (ad esempio, 6-8%) e tempi di trasferimento prolungati per il Western blotting.
• Per immunofluorescenza/ICC, ottimizzare le condizioni di fissazione e permeabilizzazione; Triton X-100 o digitonina possono essere utilizzati per rilevare la PI4KA associata alla membrana.
• Validare la specificità dell'anticorpo in linee cellulari pertinenti (ad esempio HeLa, SH-SY5Y) o tessuti noti per esprimere PI4KA, e includere un controllo negativo come lisati di polmone o fegato, dove l'espressione è bassa.
• Per ELISA, considerare l'utilizzo di un frammento ricombinante di PI4KA come standard per definire la sensibilità e l'intervallo lineare del saggio.

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