Anticorpo monoclonale di coniglio anti-PIAS1+PIAS2 per WB, IHC-P, ELISA - O75925/O75928

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di PIAS1/PIAS2

• PIAS1 agisce come ligasi E3 di SUMO e fattore di ancoraggio di SUMO, catalizzando la SUMOilazione di diversi substrati. Funziona come un co-regolatore trascrizionale fondamentale che modula le vie di segnalazione STAT, p53 e degli ormoni steroidei, attivando o reprimendo l'espressione genica a seconda del contesto cellulare. Riferimenti correlati: PMID:11583632, PMID:11867732, PMID:14500712
• PIAS1 si lega in vitro a sequenze di DNA ricche in A/T e interagisce direttamente con regioni regolatrici geniche, come la box TAAT del promotore di MYOD1, per regolare il legame dei fattori di trascrizione indipendentemente dalla sua attività di SUMOilazione. Riferimenti correlati: PMID:15133049
• PIAS1 è localizzata principalmente negli speckle nucleari e nei corpi PML, con un'ulteriore presenza nel citoplasma e un'associazione con il citoscheletro, facilitando i suoi ruoli sia nei processi nucleari sia nella segnalazione citoplasmatica.
• L'espressione tissutale è ampia, con livelli particolarmente elevati nei testicoli, suggerendo funzioni specializzate nello sviluppo delle cellule germinali.
• PIAS1 esegue la SUMOilazione di fattori chiave coinvolti nella riparazione e nella cromatina: stabilizza MRE11 sulla cromatina durante la resezione delle estremità del DNA e media la SUMOilazione selettiva del paralogo MTA1 per controllare l'espressione genica. Riferimenti correlati: PMID:36050397, PMID:21965678
• Durante l'infezione virale, PIAS1 limita la replicazione litica del virus di Epstein-Barr (EBV) inibendo i fattori di trascrizione virali; il virus può eludere questa restrizione mediante la scissione di PIAS1 mediata dalle caspasi. Riferimenti correlati: PMID:29262325
• Questo anticorpo riconosce anche PIAS2 (PIASx), una ligasi E3 di SUMO strettamente correlata, che condivide un'elevata similarità di sequenza con PIAS1 nella regione C-terminale ed è coinvolta in vie di regolazione trascrizionale analoghe.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno è un peptide sintetico che comprende gli amminoacidi 552–651 di PIAS1 umano; durante l'esecuzione del western blot, si prevede una banda principale a circa 76 kDa sia per PIAS1 sia per PIAS2.
• Per WB e IHC-P, prendere in considerazione l'utilizzo di lisati di controllo positivo provenienti da testicoli o da linee cellulari che esprimono livelli elevati di PIAS1/2 e validare l'anticorpo con proteine ricombinanti o mediante knockdown con siRNA/shRNA.
• La diluizione ottimale dell'anticorpo deve essere determinata empiricamente; iniziare con 1:500–1:2000 per WB e 1:100–1:500 per IHC-P in condizioni standard.
• A causa dell'elevata conservazione della regione epitopica, questo anticorpo rileva anche PIAS2, ma è consigliabile confermare la specificità in modelli knockout o knockdown.
• Per le applicazioni ELISA, il rivestimento con l'antigene può richiedere l'ottimizzazione della cattura del peptide o della proteina; prendere in considerazione l'utilizzo del peptide immunogeno come controllo positivo.

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