Anticorpo policlonale anti-PIKFYVE di coniglio per WB, ELISA - Q9Y2I7

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: Funzione e localizzazione di PIKFYVE

• PIKFYVE, noto anche come PIP5K3, è una chinasi a doppia specificità per lipidi e proteine seriniche che funge da unico enzima responsabile della sintesi del fosfatidilinositolo 3,5-bisfosfato (PtdIns(3,5)P2) a partire dal fosfatidilinositolo 3-fosfato (PubMed:17556371, PubMed:41639454). Riferimenti correlati: PMID:17556371 | PMID:41639454
• La proteina contiene un dominio a dito di zinco FYVE N-terminale che la indirizza alle membrane endosomiali, dove si localizza principalmente agli endosomi precoci e tardivi, ai fagosomi e alle vescicole citoplasmatiche.
• PIKFYVE è un regolatore critico dell'omeostasi delle membrane interne, controllando la fissione, la fusione e la maturazione degli endosomi; è essenziale per la transizione da endosomi precoci a tardivi e per la funzione lisosomiale (PubMed:30612035, PubMed:22621786). Riferimenti correlati: PMID:30612035 | PMID:22621786
• Attraverso la sua attività chinasica lipidica, PIKFYVE regola l'autofagia, la maturazione delle vacuoli e il recupero dei nutrienti facilitando il riciclo del contenuto lisosomiale all'interno della rete endosomiale (PubMed:27623384). Riferimenti correlati: PMID:27623384
• La chinasi gioca anche un ruolo nella segnalazione dell'insulina e nella traslocazione di GLUT4, contribuendo così all'omeostasi sistemica del glucosio (Per analogia).
• Nelle cellule immunitarie, PIKFYVE è richiesto per la fusione fagosoma-lisosoma, la generazione di ROS e la presentazione dell'antigene tramite MHC di classe II, processi vitali per l'immunità innata e adattativa (PubMed:28779020, PubMed:30612035). Riferimenti correlati: PMID:28779020 | PMID:30612035
• L'autofosforilazione di PIKFYVE downregola la sua attività chinasica lipidica e stimola la fosfatasi lipidica FIG4, creando un ciclo di regolazione che modula con precisione i livelli di PtdIns(3,5)P2 (PubMed:33098764). Riferimenti correlati: PMID:33098764
• Nota: l'enzima è dirottato da coronavirus come SARS-CoV e SARS-CoV-2 per facilitare l'ingresso cellulare tramite endocitosi.

Guida sperimentale e suggerimenti tecnici

• Poiché l'immunogeno copre gli amminoacidi 269–545 di PIKFYVE umano, ci si aspetta che l'anticorpo riconosca la proteina endogena in campioni umani, di topo e di ratto. Per il Western blotting, notare l'elevato peso molecolare (~237 kDa); utilizzare un gel di acrilamide a bassa percentuale (es. 6–8%) e tempi di trasferimento prolungati per garantire un efficiente trasferimento delle proteine.
• Per l'ELISA, questo anticorpo può essere utilizzato come reagente di cattura o di rilevamento per la proteina PIKFYVE ricombinante; confermare empiricamente le concentrazioni di rivestimento ottimali.
• Considerare l'inclusione di appropriati controlli positivi e negativi, come lisati di cellule con espressione nota di PIKFYVE, e validare l'anticorpo nel sistema sperimentale pertinente.

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