Anticorpo policlonale anti-PIWIL1 per WB, IF-P, IHC-P, ELISA - Q9JMB7

Specifiche e parametri principali del prodotto

Contesto biologico: funzione e localizzazione di PIWIL1

• La proteina 1 simile a Piwi (PIWIL1/MIWI) è un'endoribonucleasi che svolge un ruolo centrale nelle cellule germinali postnatali reprimendo gli elementi trasponibili e salvaguardando così l'integrità della linea germinale. Riferimenti correlati: PMID:11578866, PMID:21237665, PMID:22121019

• In quanto componente fondamentale della via dei piRNA, PIWIL1 si lega direttamente ai piRNA metilati, con una forte preferenza per l'uridina nella prima posizione (bias 1U), guidando la metilazione e il silenziamento dei trasposoni. Riferimenti correlati: PMID:24757166, PMID:11578866, PMID:21237665, PMID:22121019

• PIWIL1 scinde gli mRNA dei trasposoni mediante la sua attività di endoribonucleasi, ma non partecipa al ciclo di amplificazione dei piRNA (ping-pong). Riferimenti correlati: PMID:22121019

• La proteina si localizza nel citoplasma e presenta un'espressione tessuto-specifica nei testicoli (spermatociti) e nel cervello. Nelle gonadi maschili, l'espressione inizia circa due settimane dopo la nascita, in concomitanza con l'inizio della spermatogenesi.

• PIWIL1 è necessaria per la formazione del corpo cromatoide e contribuisce alla stabilità di alcuni miRNA, suggerendo ulteriori ruoli regolatori oltre al silenziamento dei trasposoni. Riferimenti correlati: PMID:16787948

• Durante la fase tardiva della spermatogenesi, PIWIL1 sequestra RNF8 nel citoplasma; la sua ubiquitinazione e la successiva degradazione liberano RNF8, consentendo lo scambio tra istoni e protamine. Riferimenti correlati: PMID:28552346

• Le principali caratteristiche funzionali includono il legame con cofattori ionici metallici (magnesio), lo splicing alternativo e le modifiche post-traduzionali (ubiquitinazione, metilazione), classificando PIWIL1 come un'idrolasi regolatoria multidominio.

Indicazioni sperimentali e suggerimenti tecnici

• L'immunogeno (amminoacidi N-terminali 1–160) si trova in una regione conservata tra uomo, topo e ratto, in linea con il profilo di reattività crociata riportato; si consiglia di verificare la reattività nel proprio specifico sistema modello.
• Per il Western blot, è prevista una banda a circa 99 kDa. Utilizzare un controllo positivo, come un lisato di testicolo murino, e validare la banda osservata con un adeguato controllo di caricamento.
• Il rilevamento mediante immunofluorescenza richiede la permeabilizzazione per consentire l'accesso alla localizzazione citoplasmatica; la co-colorazione con marcatori delle cellule germinali (ad es. DDX4) può aiutare a confermare la specificità per il tipo cellulare.
• Per l'immunoistochimica su sezioni fissate in formalina e incluse in paraffina, può essere necessario il recupero antigenico; le sezioni di tessuto testicolare costituiscono un controllo positivo adeguato.
• Le applicazioni ELISA possono trarre beneficio dall'utilizzo di un antigene di rivestimento basato su un peptide o su un frammento; titolare le concentrazioni dell'anticorpo per ottimizzare il rapporto segnale/rumore.

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